22、酶促反应实验测量与检测方法解析

酶促反应实验测量与检测方法解析

1. 酶促反应实验样本制备与初始速度测量

在酶促反应的实验研究中，精确制备实验和对照样本是至关重要的。以下是制备假设酶促反应的实验和对照样本所需储备溶液的体积：
| 储备溶液 | 实验组 (μL) | 无底物对照组 (μL) | 无酶对照组 (μL) |
| — | — | — | — |
| 10×底物 | 100 | 0 | 100 |
| 10×缓冲液 | 100 | 100 | 100 |
| 蒸馏水 | 790 | 890 | 800 |
| 酶 | 10 | 10 | 0 |
| 总体积 | 1.0 mL | 1.0 mL | 1.0 mL |

在实际实验中，我们可以通过跟踪特定波长下的光吸收减少来监测酶促反应，因为底物会转化为产物。然而，存在一些干扰因素。例如，在没有酶的情况下，可能会有低速率的自发产物形成；而且酶本身在分析波长处也会有少量但可测量的吸收。

为了获得准确的反应速度，我们需要进行必要的校正。具体步骤如下：
1. 校正酶自身吸收 ：由于酶的吸收，实验的真实吸收读数会有偏移。我们从所有实验数据点中减去这个恒定值（例如在示例中约为 0.1 单位）。
2. 校正自发吸收变化 ：如果直接确定校正后实验曲线的斜率，会高估反应速度，因为这个斜率既反映了底物到产物的催化转化，也反映了“无酶”对照曲线中的自发吸收变化。所以，我们在每个测量时间点从实验点中减去对照数据点，得到差异图，测量差异图的斜率即可得到真实的反应速度。

这种对照测量对于获得有意义的催化反