中药靶点筛选实战指南：已知成分新适应症验证 vs. 未知成分高通量筛选，LiP-MS 关键破局！

引言

中药活性成分是新药研发的“富矿”，但“不知道成分如何起效、找不到直接作用靶点”一直是制约中药现代化的关键瓶颈。近年来，随着质谱技术的发展，有限蛋白酶解 - 质谱联用技术（LiP-MS） 为中药活性成分的靶点筛选提供了高效解决方案。

今天带大家通过两篇顶刊研究 —— 分别聚焦“已知中药活性成分的新适应症验证” 和“未知中药活性成分的高通量筛选“，拆解中药靶点筛选的两种核心思路，顺便看看 LiP-MS 技术如何成为连接中药成分与疾病机制的“桥梁”。

已知活性成分的“新适应症”验证 —— 草豆蔻靶向钙调蛋白治疗MASLD

研究背景与核心目标

代谢相关脂肪性肝病（MASLD，含MASH）是全球第一大慢性肝病，但获批药物极少。山东大学团队（《Advanced Science》，2025）聚焦传统中药草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）的活性成分 —— Alnustone（阿尔诺酮） 。此前研究已证实它有抗炎、抗菌、抗癌活性，且其同类成分（如姜黄素）已被报道可改善 MASLD。

因此，团队的核心目标不是 “筛选新成分”，而是验证 Alnustone 对 MASLD/MASH 的治疗潜力，并找到其直接作用靶点。

筛选与验证逻辑：“先疗效，后靶点”的精准验证

Alnustone 已有明确生物活性基础，研究跳过了 “化合物库筛选” 步骤，直接进入体内外多模型验证，全程围绕 “疗效 - 机制 - 靶点” 展开：

1. 体内：覆盖 4 种 MASLD/MASH 模型，验证疗效普适性

构建饮食诱导、遗传缺陷、纤维化共 4 种 MASLD/MASH 小鼠模型，排除模型特异性干扰。结果显示，Alnustone 经腹腔注射或口服均能降低血清甘油三酯、减少肝脂沉积、逆转肝纤维化，对雌雄小鼠均有效且无副作用。

2. 体外：锁定肝细胞，解析代谢机制

在小鼠及人类肝细胞的脂肪变性模型中，明确 Alnustone 通过促进线粒体脂肪酸 β- 氧化减少甘油三酯堆积，排除其他代谢机制干扰。

3. 靶点筛选：LiP-SMap + 多技术验证，锁定钙调蛋白

采用有限蛋白酶解 - 小分子映射（LiP-MS）技术筛选潜在靶点，后续通过多方法验证：

▶ LiP-SMap 分析：从差异蛋白中筛选出钙调蛋白，其为调控细胞内 Ca²⁺信号的关键蛋白；

▶ 结合特性验证：通过分子对接、表面等离子共振（SPR）、微量热泳动（MST），确认 Alnustone 直接结合钙调蛋白的 Ca²⁺结合位点；

▶ 功能必要性验证：构建肝脏特异性钙调蛋白敲除小鼠，发现 Alnustone 的降脂、抗纤维化效果完全消失，证实钙调蛋白是其必需作用靶点。

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未知活性成分的 “高通量筛选”—— 紫堇灵靶向 PSMA2 抗胰腺纤维化

研究背景与核心目标

慢性胰腺炎（CP）的核心病理特征是胰腺纤维化，但目前尚无有效逆转药物。海军军医大学团队（《Journal of Gastroenterology》，2024）从大量中药单体中，筛选出能抑制胰腺纤维化的“未知活性成分”，并明确其靶点。

筛选与验证逻辑：“先筛成分，再证疗效，最后找靶点”

由于胰腺纤维化的中药活性成分研究较少，无明确 “同类有效成分” 参考，团队采用 “无偏向性高通量筛选” 策略：

1. 第一步：构建 80 种中药单体库，体外预筛选

构建 80 种中药单体库，用 TGF-β1 刺激人胰腺星状细胞（HPSCs，胰腺纤维化关键细胞）模拟病理过程，通过细胞活力检测筛选出候选成分紫堇灵（Corynoline）。

2. 第二步：验证成分特异性，排除非特异性细胞毒性

检测 Corynoline 对其他胰腺细胞（胰腺导管细胞、腺泡细胞）的影响，确认其仅靶向抑制 HPSCs 的活化、迁移及胶原合成，对其他胰腺细胞无毒性。

3. 第三步：体内验证，确认抗纤维化疗效

在雨蛙肽诱导的 CP 小鼠模型中，Corynoline 可改善胰腺形态、恢复胰内外分泌功能、抑制 NF-κB 炎症通路。

4. 第四步：靶点筛选，LiP-SMap 结合 DARTS 验证 PSMA2

▶ LiP-SMap 分析：差异蛋白富集于 “蛋白酶体核心复合物” 通路，其中蛋白酶体 20S α2 亚基（PSMA2）的肽段差异最显著；

▶ 结合验证：通过 DARTS 证实 Corynoline 可保护 PSMA2 不被蛋白酶降解，确认两者直接结合；

▶ 功能验证：敲低 PSMA2 后，Corynoline 的抗纤维化效果完全消失，证实 PSMA2 是其必需作用靶点。。

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两种筛选思路的核心异同：已知 vs 未知

LiP-MS 技术：中药靶点筛选的 “破局者”

两篇研究均选择 LiP-MS 技术（LiP-SMap）筛选靶点，正是因为它完美解决了中药成分靶点筛选的两大痛点：

1. 无需修饰化合物，保留天然活性

传统靶点筛选（如亲和色谱）需对中药成分进行化学修饰（如生物素标记），但修饰可能破坏成分的天然结构和活性，导致 “假阴性”。

而 LiP-MS 无需修饰：药物与靶点的结合是 “天然状态”，仅通过蛋白酶解敏感性差异即可锁定靶点 —— 这对结构复杂的中药成分尤为重要。

2. 覆盖 “全蛋白组”，无偏向性

中药成分常存在 “多靶点作用”，但 LiP-MS 可一次性检测数千种蛋白的差异肽段，避免 “预设靶点” 的局限性。例如 Alnustone 的研究中，团队最初推测其作用于线粒体相关蛋白，最终却通过 LiP-MS 发现靶点是钙调蛋白，修正了研究方向。

3. 结合多技术验证，确保靶点可靠性

两篇研究均未仅凭 LiP-MS 下结论，而是搭配：

▶ 结构验证：分子对接（预测结合位点）；

▶ 亲和力验证：SPR/MST（量化结合强度）；

▶ 功能验证：基因敲除 / 过表达（证实靶点必需性）；

▶ 补充技术：Corynoline 研究用 DARTS 进一步确认结合，降低假阳性。

总结：中药研究的“思路选择指南”

▶ 若探索已知活性中药成分的新适应症：直接通过 “体内多模型 + 体外细胞” 验证疗效，再用 LiP-MS 锁定靶点，聚焦 “疗效 - 机制 - 靶点” 闭环。

▶ 若挖掘中药全新活性成分：先构建单体库，经体外病理细胞模型高通量初筛，验证特异性后推进体内实验及 LiP-MS 靶点筛选。

无论哪种思路，LiP-MS 都是中药靶点筛选的核心工具：它不仅能破解中药“多成分、多靶点”的复杂性，还能为中药活性成分的“现代化阐释”提供直接证据 —— 让中药的“有效”不再是“黑箱”，而是可量化、可重复的科学结论。未来，随着 LiP-MS 技术的普及，相信会有更多中药活性成分的作用靶点被解析，为中药新药研发提供“从传统到现代”的桥梁。

参考文献

[1]Wang P, Huang B, Liu Y, et al. Corynoline protects chronic pancreatitis via binding to PSMA2 and alleviating pancreatic fibrosis. J Gastroenterol. 2024;59(11):1037-1051. doi:10.1007/s00535-024-02145-4
[2]Hu S, Liang X, Qin Y, et al. Alnustone Ameliorates Metabolic Dysfunction-Associated Steatotic Liver Disease by Facilitating Mitochondrial Fatty Acid β-Oxidation via Targeting Calmodulin. Adv Sci (Weinh). Published online June 5, 2025. doi:10.1002/advs.202411984