GST Pull-down

蛋白-蛋白相互作用是蛋白质结构与功能研究中最重要的方面之一。GST Pull-down是一种在试管中检测蛋白互作的方法，其原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白，“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

背景说明

GST Pull-down是一种在试管中检测蛋白互作的方法，其原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白，“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。

图 GST Pull-down验证蛋白互作原理及流程图。

服务流程

客户在线下单——订单/实验材料确认——样品处理——GST/His-诱饵蛋白原核表达载体构建——原核表达——蛋白纯化——Pull-down捕获猎物蛋白——SDS-PAGE电泳——Western blot或LC-MS/MS

服务内容及说明

适用范围

1、用于验证两个已知蛋白的相互作用；

2、筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。

GST Pull-down的优点

1、鉴定的蛋白是直接作用的蛋白，非间接作用的复合体；

2、GST标记可把一些难溶蛋白变成可溶蛋白，使实验变得更易操作；

3、GSH谷胱甘肽偶联球珠亲和力强，洗脱纯度高。

GST Pull-down的缺点

1、两个非同一定位的蛋白可能因电荷或是强亲和力的原因造成假阳性，需用其他方法再次验证，例如Co-IP等；

2、验证互作是在试管中进行的生化反应，不能够完全反映细胞内蛋白真实互作的状态；

3、融合表达的GST标签，肽链较长，可能会改变原目的蛋白原有的折叠结构。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式，提交项目所需要的具体信息：

1、探针基因和靶基因相关序列信息；

2、样品种属及类型；

3、尽可能丰富的相关资料、文献。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付与标准

1、载体：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）；

2、载体的测序结果；

3、实验报告。