笔记分享 | 免疫组化染色Protocol

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免疫组化染色

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推文导读

免疫组化，是应用免疫学基本原理—抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素，酶，金属离子，同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位，定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术（immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry)。
基本原理：抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中同类的抗原物质。由于抗原和抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中未知抗原进行定性，定位或定量的研究。—百度百科

实验Protocol

组织脱蜡和组织清洗

1. 组织切片样本通过脱蜡处理（这里的脱蜡和HE脱蜡一样，脱至70%酒精溶液时停止，然后在流水中冲洗10 min)。
2. 10 min冲洗之后把切片放进クエン酸水溶液中浸泡，クエン酸用多少根据你的切片组织位置来判定（关键是要把组织全部浸泡到）。
3. 把步骤2中浸有切片组织的クエン酸放在Micro wave 内加热直至クエン酸溶液沸腾为止（600W的电磁炉一般3分钟即可），沸腾之后马上开始计时并且进行加热。流程为：沸腾后继续加热3分钟—>OFF にして、冷3分钟—>热3分钟—>冷3分钟—>热3分钟—> 停止加热（注：加热至沸腾之后，断断续续加热的时间为10分钟）把器皿拿出来放在室温下冷却直至常温。
4. 完全冷却之后，用准备好的PBS液体进行冲洗一下，冲洗完成之后进行下一步：用双氧水（H2O2)：甲醇（CH3OH）=1：1