18、人多能干细胞衍生的感觉样神经元研究进展

人多能干细胞衍生的感觉样神经元研究进展

1 细胞分化过程

1.1 分化时间及现象

细胞分化过程是一个循序渐进的过程，在不同的时间节点会呈现出不同的特征，以下是具体的时间及对应现象：
|时间|现象|
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|第1天|可能已出现变化，但有时可能需要多一天才可见|
|第2天|细胞形态改变，不同外观的细胞岛在其他细胞条纹间可见；向含强力霉素的分化培养基中添加嘌呤霉素（10 μg/ml）以去除未被病毒感染的细胞|
|第3天|因前一天添加嘌呤霉素，可见一些细胞死亡；更换为分化培养基 + 强力霉素；祖细胞明显可见，形似小蜘蛛；根据实验计划准备层粘连蛋白和纤连蛋白包被的表面|
|第4天|祖细胞应呈现均匀群体，形似小蜘蛛；用PBS洗涤细胞一次；加入1 ml Accutase；在37°C孵育最多5分钟；用球体培养基冲洗培养板收获细胞；将细胞收集到15 ml管中；以1000 rpm离心4分钟；吸去上清液；将沉淀重悬于1 ml分化 + 强力霉素培养基中；计数细胞；以26,000个细胞/cm²的密度接种于新鲜包被表面的分化 + 强力霉素培养基中|
|第5天|细胞应开始呈现带有小神经突的神经元外观；更换分化 + 强力霉素培养基|
|第6 - 10天|每天更换分化 + 强力霉素培养基；细胞每天更像神经元，形成复杂的突起网络，几乎不应见其他细胞类型；若出现非神经元细胞，可在第10天前进行过夜嘌呤霉素处理|
|第11天|更换为不含强力霉素的分化培养基|
|第13天|为防止剩余非神经元细胞生长，用有丝分裂抑制剂（如丝裂霉素C）处理培养物；向细胞培养基中加入丝裂霉素C（10 μg/ml）45分钟；更换为新鲜分