17、人类多能干细胞衍生感觉神经元的分化策略

人类多能干细胞衍生感觉神经元的分化策略

在神经科学研究中，将成纤维细胞或多能干细胞转化为感觉神经元是一项重要的技术，它为研究神经系统疾病和开发新的治疗方法提供了有力的工具。本文将介绍几种不同的分化策略及其特点。

1. Blanchard等人的方法（2015年）

Blanchard等人报道了一种将小鼠或人类成纤维细胞直接转化为感觉样神经元的方法。他们使用了两种可诱导的慢病毒载体，分别携带转录因子BRN3A和Ngn1或BRN3A和Ngn2的cDNA。这些转录因子在感觉神经元的发育中起着重要作用。

• 分化过程 ：
  • 体外分化通过强力霉素（dox）处理诱导转录因子的瞬时表达。在最初的8天内，转录因子表达，随后去除dox，进行至少7天的成熟培养。
• 细胞特征 ：
  • 得到的细胞表现出各种感觉神经元亚型的分子、形态和功能特征。免疫细胞化学显示某些泛感觉标记物（如ISL1和BRN3A）以及更具亚型特异性的标记物（如神经丝200、外周蛋白、TRKA、TRKB、TRKC、VGLUT1、VGLUT2、RET）的表达。
  • 功能分析表明，部分神经元对TRPV1激动剂辣椒素、TRPA1激动剂芥子油或TRPM8激动剂薄荷醇有增加的钙反应。电生理记录也支持衍生神经元的功能，部分神经元存在对TTX耐药的NaV 1.8通道。此外，使用瘙痒感受器激动剂的钙成像实验显示，一小部分细胞对不同化合物有选择性反应。
• 效率和多样性