【评测】CRISPR基因编辑新技术双淬灭探针技术解读

PRIMETIME ™ qPCR 探针

用于 5’ 端核酸酶分析试剂的双淬灭和单淬灭探针

各种实验均适用的染料和淬灭剂

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PrimeTime qPCR 探针具有可靠的灵敏度，即使在多重 PCR 和数字 PCR 等要求严格的应用环境下也不例外。PrimeTime qPCR 探针提供多种染料/淬灭剂组合，与常用的 qPCR 仪器兼容（表 1）。

达到一致的结果

所有 PrimeTime 探针均经过 HPLC 纯化，然后通过质谱法进行验证，以达到批间一致并尽可能减少纠错的需要。

表 1. 常用荧光基团和淬灭基团

* 含 6-FAM、SUN、JOE、MAX 或 HEX 荧光 基团的探针还作为传统的单淬灭探针提供， 包含 Iowa Black FQ（无需许可）或 Black Hole Quencher-1（需要专门的第三方许可 才能用于诊断）。 † Black Hole Quencher-2 (BHQ2) 还可用作 淬灭剂（需要专门的第三方许可才能用于 诊断）。 ‡ 双淬灭探针需定制订购。 § ATTO 标记探针需定制订购。 ¥ Cy 5 也可作为单淬灭探针提供，包含 BHQ2 （需要专门的第三方许可才能用于诊断）。 ¶ 仅供研究使用。

使用双淬灭探针提高分析试剂灵敏度

使用 ZEN 或 TAO 双淬灭探针可降低本底荧光并提高 分析试剂灵敏度。我们的独家内置淬灭基团与 5’ 端荧光 基团相隔 9 个碱基，并与 3’ 端 Iowa Black 淬灭基团配合， 以达到最高的探针性能（图 1）

图 1. PrimeTime qPCR 5’ 端核酸酶分析试剂示意图，使用一种包含 染料、ZEN 或 TAO 内置淬灭基团和 3’ 端淬灭基团的双淬灭探针。

ZEN 双淬灭探针的本底荧光低将近 4 倍（图 2A），信号强度提高约 30%（图 2B），表现更出色。

图 2. ZEN 双淬灭探针的信号检测和分析试剂灵敏度均更高。(A) ZEN 探针（浅蓝色）的染料淬灭更高，产生的本底荧光更低，因此信号强度高于 标准单淬灭探针（BHQ 探针；深蓝色）。(B) ZEN 探针提高了分析试剂灵敏度，表现为 Cq 值比标准 BHQ 单淬灭探针出现得更早。

对长探针的淬灭效率达到最高

ZEN 双淬灭探针可以有效淬灭长达 40 个碱基，说明其设计更有效，即使对 AT 富集靶点也不例外。

图 3. 只有 ZEN 双淬灭探针可以在探针长度不断增加的情况下 维持低本底信号。在 10 次单重 qPCR 中，比较了含 5 种不同淬灭 基团、2 种长度（20 或 40 个碱基）的探针。在 Applied Biosystems 7900HT 系统上，使用 50 ng cDNA 和 TaqMan® 基因表达预混合液 (Thermo Fisher) 在标准扩增条件下对每种探针完成 6 次重复反应。 图例：IBFQ = Iowa Black FQ Quencher (IDT)；BHQ-1 = Black Hole Quencher-1 (Biosearch Technologies)；MGB Eclipse® = Eclipse quencher (ELITech Group)。
 

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