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PCR技术自从1985年由Mullis发明以来,被广泛的应用到核酸分子的检测当中。但显然,只能定性分析而无法定量,成为困扰科研工作者的一大难题。仅仅在5年之后,就有了一些初步的尝试,并取得了不错的效果。
Pang等人在采用了一种PCR后分子显像的方法来进行定量[1],将PCR的原料ATP用32P标记,掺入到产物中去,用自显影技术进行分析(Fig 1),其精度足以区分两倍浓度的差异。这种方法操作相对繁琐,且涉及放射性标记;另外,其检测方式仍稍显粗糙,仅考量条带的光密度值,属于半定量的范畴,同时还需要将扩增循环数控制在指数期(30个之内)。该方法尽管未得到广泛应用,但却迈出了突破性的一步。

本文回顾了PCR技术从定性到定量的发展历程,重点介绍了从自显影PCR、定量竞争PCR到实时定量PCR(qPCR)的演变。qPCR通过荧光标记和实时监测,实现了核酸分子的高效定量,具有高精度、高灵敏度和操作简便等优点。文中还提及了qPCR在基因表达、疾病诊断和蛋白质检测等领域的应用,并展望了未来技术的融合与创新可能带来的新突破。
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