单链DNA寡核苷酸链的同源重组建库（CRISPR sgRNA 建库）

愿武艺晴小朋友一定得每天都开心！ 

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参考和复现的Bridging dsDNA with a ssDNA Oligo and NEBuilder® HiFi DNA Assembly to create an sgRNA-Cas9 Expression Vector 作者：Peichung Hsieh, Ph.D., New England Biolabs, Inc

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix (NEB #E2621)

》》原理示意图：

       

NEBuilder 高保真 DNA 组装预混液可以高效、准确地组装 DNA 片段。不管片段的长短和末端匹配性如何，该方法都可以无缝组装多个 DNA 片段。还可以组装单链寡核苷酸或含 15-30 bp 重叠区的不同片段长度的 DNA 片段。此方法操作简单、灵活，以预混液形式提供，主要用于合成生物学和多片段的一步克隆。在同一反应缓冲液中有几种不同的酶活性（见上图 ）：

• 核酸外切酶活性会产生单链 3´ 突出末端，促使互补的末端重复序列（重叠区）退火
• 聚合酶活性会填补退火片段的缺口
• DNA 连接酶活性能在组装后的 DNA 切刻处进行连接

此外，NEBuilder HiFi DNA Assembly 的 3' 错配去除功能允许在组装过程中去除短条形码 （&l