检测sgRNA的编辑效率

愿武艺晴小朋友一定得每天都开心！ 

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【sgRNA的设计】

》》一文掌握gRNA的设计，常用方法汇总解析 – 王进的个人网站

网址：CRISPR-ERA 这个感觉蛮好用的

第一步：分选编辑过的细胞，提取DNA。

              例如：1mL DF10收集长满 6cm dish 编辑过的3T3-cas9细胞【已分选】，1:4传代培养时，取250uL的细胞用于提取基因组DNA。

             操作步骤按：碧云天生物技术-动物基因组DNA快速抽提试剂盒(PCR分析用)(D0065M)

这个来操作感觉蛮好的

第二步：PCR扩增编辑的目标区域。并胶回收。PCR扩增产物大小为：750bp。

第三步：T7E1酶切，并凝胶电泳检测编辑效率。

第四步：将编辑效率高的【有大于1条带的胶回收产物】送测序。

其中的一些tips:

1) PCR扩增时：引物设计很重要：目标条带750bp;并在sgRNA的两端各约375bp左右为好。