23、电子显微镜下脊髓组织处理及小鼠疼痛相关神经回路可视化方法

电子显微镜下脊髓组织处理及小鼠疼痛相关神经回路可视化方法

在神经科学研究中，电子显微镜技术以及利用病毒载体追踪神经回路的方法对于深入了解神经结构和功能至关重要。本文将详细介绍脊髓组织树脂包埋、包埋后免疫金标记、冷冻置换树脂包埋等电子显微镜样本处理方法，以及使用病毒载体可视化小鼠疼痛相关神经回路的策略。

电子显微镜样本处理方法

树脂包埋脊髓组织

为了最佳保留脊髓组织的超微结构特征，在进行树脂渗透之前，组织切片需要用重金属浸渍并脱水。具体操作步骤如下：
1. 锇酸处理 ：将切片置于1%四氧化锇中30分钟。
2. 蒸馏水冲洗 ：用蒸馏水冲洗3次，每次10分钟。
3. 醋酸铀孵育 ：在70%丙酮的饱和醋酸铀中孵育30分钟。
4. 丙酮梯度脱水 ：依次在90%丙酮中孵育10分钟，然后在100%丙酮中孵育3次，每次10分钟。
5. 树脂混合液孵育 ：在100%丙酮/杜尔库潘树脂混合液（1:1）中孵育60分钟。
6. 纯树脂孵育 ：在室温下用杜尔库潘树脂孵育12 - 18小时。
7. 平板包埋 ：将切片平放在醋酸盐片之间，在60°C下孵育24 - 48小时。

包埋后的组织可用于超薄切片机切片。

以下是该过程的流程图：

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