21、脊髓背角突触连接研究方法解析

脊髓背角突触连接研究方法解析

1. 研究背景与重要性

在中枢神经系统中，明确突触回路对于深入理解正常和病理状态下的疼痛通路至关重要。电生理记录、化学遗传学和光遗传学方法有助于研究这些回路的功能和药理学基础，但确定神经元之间的解剖关系和突触连接同样重要。

免疫组织化学方法的特异性可用于定义神经元群体，结合共聚焦显微镜和透射电子显微镜（TEM），能在解剖学研究中定义突触回路。由于脊髓回路的去抑制被认为是多种慢性疼痛状态发展的重要特征，因此研究脊髓背角浅层初级传入终末以及兴奋性和抑制性中间神经元的突触连接备受关注。

2. 突触传递与标记物

2.1 神经递质与突触传递

• 兴奋性传递 ：初级传入终末和兴奋性中间神经元形成的突触处，主要通过释放谷氨酸进行兴奋性传递。
• 抑制性传递 ：脊髓背角的抑制性突触传递由GABA和/或甘氨酸的释放介导。

2.2 免疫组织化学标记物

• GABA能神经元 ：使用针对谷氨酸脱羧酶（GAD）及其两种同工型（GAD65和GAD67）的抗体，可识别脊髓中GABA能中间神经元的轴突终末。
• 甘氨酸能神经元 ：针对神经元甘氨酸转运体（GlyT2）的抗体用于可视化甘氨酸能神经元的轴突终末。由于层II中的几乎所有甘氨酸能神经元也是GABA能的，因此针对囊泡GABA转运体（VGAT）的抗体常用于研究背角中的抑制性轴突终末。