32、啮齿动物脊髓的体内光学成像技术：优势与挑战

啮齿动物脊髓的体内光学成像技术：优势与挑战

1. 脊髓窗口技术

1.1 传统金属脊髓窗口

早期的脊髓窗口采用氰基丙烯酸酯胶水和牙科水泥将其固定在脊柱上。使用这种窗口时，作者观察到脊髓内炎症细胞增多，不过在植入后40天炎症会部分消退。然而，金属脊髓窗口存在局限性，它与一些其他成像技术不兼容。

1.2 新型聚碳酸酯脊髓窗口

为克服金属脊髓窗口的局限，Figley等人开发了一种使用聚碳酸酯材料的脊髓窗口。该窗口呈十字结构，有四个臂以在成像时提供稳定性，中间有一个用于放置盖玻片的孔。它被用于小鼠和大鼠的多模态成像，包括体内荧光和声学成像。与之前将窗口附着在脊柱上的设计不同，Figley等人的窗口是缝合在背部皮肤和肌肉上的，这可能会因呼吸和心跳导致更多的运动伪影。不过，他们报告称在植入后72小时内，脊髓炎症水平较低，且无宏观损伤。通过清除盖玻片上容易去除的轻度组织堆积物，他们能够在植入后29天内观察脊髓。

总体而言，慢性脊髓窗口的使用需要高水平的外科手术技能。但一旦掌握，这些窗口可以对脊髓结构和事件进行反复分析，为揭示因果关系提供强大的纵向研究方法。

2. 体内脊髓成像的准备工作

2.1 所需材料

• 标记细胞的小鼠 ：可以是转基因小鼠、脊髓直接用染料或病毒载体标记的小鼠，或向投射靶点注射逆行示踪染料或病毒载体的小鼠。需注意，使用共聚焦甚至双光子显微镜时，只有上层板层可见。
• 显微镜 ：具有足够低的载物台以放置动物，并配备稳定设备的落射荧光、共聚焦或多光子显微镜。 </