生物化学（实验流程） PCR : 植物提取RNA & 电泳评估RNA纯度

RNA提取

• 参考视频链接

一、实验步骤总览

• 注：视频使用的是TRIzol/三氯仿法，其他常见RNA 提取方法如下：

类型	适用样本	原理	特点
TRIzol/三氯仿法	广泛（动物、植物、细菌）	酚-氯仿分相	价格低、产量高，操作需小心毒性
柱式提取法（Spin Column）	常用于动物组织、细胞	吸附纯化	快速简便、重复性好
磁珠法（Magnetic Beads）	临床样本、自动化提取	核酸吸附磁珠	自动化友好、适合高通量检测
植物专用提取包	含多糖、多酚的植物	改良裂解液	抗污染能力强，防 RNA 降解
病毒 RNA 提取包	血清、拭子等低 RNA 样本	高灵敏磁珠或柱法	可用于 RT-qPCR 检测病毒 RNA，如新冠、流感等

二、工具和耗材

• R1-600 总 RNA 提取试剂箱
• RNA 专用离心筒（DEPC 处理）
• RNA 专用枪头和移液枪
• RNA 专用研磨棒和研磨针
• 无 RNase 清洗副耗品（比如 RNA Zap）
• 液氧，无水乙醇，75% 乙醇（DEPC 处理水配笔）
• 漏水槽，风扇等
• 雪光积存器，4℃ 和 -80℃ 冷冻箱

三、操作流程

清洗清除

1. 研磨棒、研磨针和钥匙用无水乙醇洗净，烧亮焰消毒，消除 RNase 溃染；
2. 清洗完成后，将工具预冷至液氧温度。

预备和研磨

1. 将植物样品放入研磨针，加入液氧，硬化样品；
2. 带上棉手套，快速研磨，注意全程保持低温，随时补充液氧，防止 RNA 降解；

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• 哈哈，有没有人拿这个去做个液氮冰激凌
  

RNA 提取

1. 快速转移至离心筒，加入1 mL RNA 提取试剂，混合，带套需要先冷藏；
   

2. 应用 200 μL 氯仿(或替代物)，先混合，然后等待 3 分钟，进行离心：12,000 rpm，4℃，10 分钟；

3. 将上层 RNA 水相小心吸取，907 移入新筒，加入等体积异体酒，混合，离心：12,000 rpm，10 分钟；
   

4. 置换上清液，添加 75% 乙醇，重复离心：12,000 rpm，5 分钟；
   

5. 打开筒盖，吸出乙醇（注意,不要吸到底下的白色沉淀），风扇吹干，确保乙醇全部振去；

6. 加入 30 μL RNase-Free 水，混合溶解 RNA，筒保 4℃ 短期存放，-80℃ 长期存放。

RNA 电泳

凝胶准备

样品准备

• 在RNA样品中加入RNA Loading Buffer。

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加样与电泳

• 将凝胶放入电泳槽，加入足够的电泳缓冲液覆盖凝胶。
• 用微量枪向凝胶加样孔中缓慢加样。
• 一般每孔上样 0.5~2 μg RNA。
• 同时上RNA Marker（如RiboRuler RNA Ladder）。

检测RNA完整性\评估RNA纯度

• 电泳后应出现清晰的28S和18S rRNA条带，其中28S条带强度约为18S条带的2倍。如果条带模糊、拖尾，说明RNA降解，不适合下游实验。

• 这是因为真核细胞中的核糖体RNA（rRNA）在细胞中的天然比例所决定的，RNA中大部分都是rRNA，主要有以下几种：

rRNA种类	大小（真核）	归属	主要功能
28S rRNA	~5000 nt	大亚基（60S）	蛋白合成
18S rRNA	~1900 nt	小亚基（40S）	蛋白合成
5.8S rRNA	~160 nt	大亚基（60S）	蛋白合成
5S rRNA	~120 nt	大亚基（60S）	蛋白合成