染色质免疫共沉淀定量PCR(ChIP-qPCR)

染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一种适用于研究体内DNA与蛋白质相互作用的经典方法,主要包括ChIP-seq和ChIP-qPCR和两种。其中ChIP-seq用来筛选与目标蛋白结合的未知DNA片段,ChIP-qPCR用来验证与目标蛋白结合的已知DNA片段。

背景说明

ChIP的原理是在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理,将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,随后,特异性富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片段的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。ChIP-qPCR是将染色质免疫共沉淀和定量聚合酶链反应分析相结合的技术,免疫沉淀依赖于目的蛋白特异性抗体对蛋白与染色质复合体的富集,然后通过非特异性掺入DNA双链的荧光染料对结合蛋白的富集程度进行定量分析。

图 ChIP-qPCR实验技术流程图(Giaimo et al., 2017)。

ChIP-qPCR服务流程

客户在线下单——订单/实验材料确认——材料准备——甲醛交联——染色质片段化——免疫共沉淀——解交联并纯化DNA片段——qPCR分析——结果交付

服务内容及说明

技术优势

ChIP-qPCR是一种集高特异性、灵敏度和重复性于一体的分子生物学技术,它能够快速、精确地定量分析特定转录因子或组蛋白修饰在目标基因启动子区域的结合水平。该技术的核心优势在于其基于体内富集的特点——相较于体外结合实验(如EMSA),ChIP-qPCR通过捕获天然染色质环境下的蛋白质-DNA互作,更能真实反映生理状态下的结合动态。这种接近生理条件的数据可靠性,使其成为众多研究者验证染色质互作的首选方法,尤其在需要高重复性数据的机制研究中(如转录调控分析、表观遗传修饰研究),ChIP-qPCR的稳定表现常被顶级期刊列为关键实验证据。

实验周期

致电详询

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息(可联系区域销售经理),

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验交付内容

1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);

2、ChIP实验图片及分析结果。

案例展示

图 ChIP-qPCR检测ESCs中PRDM15结合在靶基因启动子区域上的富集情况(Mzoughi et al., 2020)。

参考文献

Giaimo B D, Ferrante F, Borggrefe T. Chromatin immunoprecipitation (ChIP) in mouse T-cell lines[J]. JoVE (Journal of Visualized Experiments), 2017 (124): e55907.

Mzoughi S, Di Tullio F, Low D H P, et al. PRDM15 loss of function links NOTCH and WNT/PCP signaling to patterning defects in holoprosencephaly[J]. Science advances, 2020, 6(2): eaax9852.

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