大鼠原代肾小管上皮细胞培养扩增方案

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取材：

1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)：
①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。
②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。
③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。
④用玻璃注射器内芯于80目网上充分研磨组织。
⑤收集 80 目网下液体转移至 100 网筛上，用生理盐水冲洗。
⑥将100目网上组织用生理盐水冲洗入另一培养皿中，收集置入离心管中。1500 转/分钟离心5分钟，弃去上清。

2 肾小管节段的消化及培养
①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重悬沉淀，37℃温箱中消化约10分钟。
②加入3ml(双倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 转/分离心8分钟，弃上清。
③加入约3ml RPMI1640 悬浮沉淀，并用吸管充分吹打混匀，接种于培养瓶中。
④分离肾小管节段接种于培养瓶后，第一天加入少量培养基，置入37℃,5%CO2孵育箱中静置培养。
⑤培养过夜后，第二天加入足量的培养基，静置培养。
⑥培养 72 小时后首次换液，以后每两天换液一次。
⑦约第六到七天细胞生长基本融合成单层。