【评测】lonza 肝脏细胞(Hepatocytes)/ADMETox

 

肝脏细胞订制服务,包括但不限于以下物种:
 

 

人及动物肝脏细胞培养基
 
 
 
 
 
 
HepaRG细胞及培养基
 
NoSpin HepaRG™ is a fully-functional, adult-phenotype, human hepatic cell line. The NoSpin HepaRG™ exhibits many characteristics similar to primary human hepatocytes and can be used for many of the same applications. The NoSpin HepaRG™ is provided in a convenient, terminally differentiated, cryopreserved format that does not require theuser to centrifuge, resuspend, or count the cells after thawing. Each lot has consistent yield, viability, and functionality across multiple applications.
 
 
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<think>好的,用户现在问的是能否将HCMEC/D3细胞的培养基从原来的EGM-2 MV改为ECGM。首先,我需要回顾之前的对话,之前用户询问的是流式细胞周期分析检测细胞衰老的实验方案,其中提到HCMEC/D3细胞使用的是EGM-2 MV培养基。现在用户可能想换培养基,可能出于成本、实验需求变化或者其他原因。 首先,我需要确认ECGM是什么培养基。EGM-2 MV是Lonza公司的内皮细胞培养基,专门为微血管内皮细胞设计,含有生长因子如VEGF、EGF、FGF等,以及血清和其他补充成分。而ECGM可能指的是另一种内皮细胞培养基,比如PromoCell的Endothelial Cell Growth Medium,或者不同公司的类似产品。用户需要明确ECGM的具体成分和供应商,因为不同品牌的培养基配方可能差异较大。 接下来,要考虑更换培养基对HCMEC/D3细胞的影响。HCMEC/D3是脑微血管内皮细胞系,对培养基的要求较高。如果ECGM是专门为类似细胞设计的,可能可以替代,但需要验证。如果ECGM缺少某些关键成分,比如特定的生长因子,可能导致细胞生长缓慢、形态改变甚至死亡。 用户可能没有说明换培养基的原因,可能是成本考虑,或者ECGM更容易获取,或者他们想尝试不同的培养基以优化实验条件。我需要建议用户先查阅文献,看看是否有使用ECGM培养HCMEC/D3的先例,或者联系培养基供应商获取技术资料,确认是否适用于该细胞系。 另外,用户之前进行的是细胞衰老相关的流式检测,更换培养基可能会影响细胞的生长状态和周期分布,进而影响实验结果。因此,在更换培养基后,需要重新优化实验条件,并进行严格的对照实验,确保结果的可靠性。 还需要提醒用户,更换培养基时应该逐步过渡,比如先混合两种培养基,逐渐增加ECGM的比例,观察细胞状态的变化。同时,关键是要监测细胞的增殖率、形态、以及特定标记物的表达(如CD31、VE-cadherin等内皮细胞标记),确保细胞特性没有发生改变。 此外,如果用户已经用EGM-2 MV进行了前期实验,突然更换培养基可能会导致数据不一致,影响实验的可重复性。因此,建议在更换前做好充分的预实验和验证,包括生长曲线分析、细胞周期基线测定等。 最后,需要总结更换培养基的可行性步骤,包括成分对比、预实验设计、逐步过渡方法以及验证指标,帮助用户系统评估是否可行,并避免潜在的实验风险。</think>--- ### **HCMEC/D3细胞更换ECGM培养基可行性分析** --- #### **一、基础信息对比** | 参数 | EGM-2 MV (Lonza) | ECGM (典型配方) | |--------------------|--------------------------------------|----------------------------------| | **适用细胞** | 微血管内皮细胞(包括HCMEC/D3) | 通用内皮细胞 | | **基础培养基** | MCDB 131 | M199/DMEM/F12混合基 | | **关键添加物** | • 5% FBS<br>• hEGF/hVEGF/hFGF<br>• 氢化可的松/抗坏血酸 | • 2-10% FBS<br>• ECGF提取物<br>• 肝素 | | **特殊成分** | 丁酰环腺苷酸(促进屏障功能) | 通常不含特异性屏障功能增强剂 | --- #### **二、可行性评估要点** **1. 细胞功能匹配性** - **屏障功能**:EGM-2 MV含0.5mM 丁酰环腺苷酸(关键跨内皮电阻维持剂),ECGM通常不含此成分 - **增殖需求**:EGM-2 MV含5% FBS + 生长因子三连(hEGF 10ng/mL, hVEGF 0.5ng/mL, hFGF 1ng/mL),ECGM的ECGF提取物成分不稳定 **2. 文献支持度** HCMEC/D3原始文献(*J Cell Physiol* 2005, 204:166) 明确使用EGM-2 MV 使用ECGM的报告仅见于部分大鼠肺微血管内皮细胞研究(*Am J Physiol Lung* 2018) **3. 预实验设计建议** ```markdown 1) 梯度替换:按25%-50%-75%-100%比例逐步替换ECGM 2) 监测指标: • 24h贴壁率(应>90%) • 72h增殖曲线(CCK-8检测) • TEER值(屏障功能金标准) 3) 功能验证: • CD31/PECAM-1表达流式检测 • DiI-Ac-LDL吞噬实验(内皮特性验证) ``` --- #### **三、关键风险与解决方案** | 风险点 | 解决方案 | 检测频率 | |---------------------|-----------------------------------|-------------------| | 细胞去分化 | 添加0.5mM 丁酰环腺苷酸(额外补充)| 每代次免疫荧光检测| | 增殖速率下降 | 补充5ng/mL重组hFGF-basic | 每日细胞计数 | | 屏障功能丧失 | Transwell体系持续监测TEER值 | 每次传代后检测 | --- #### **四、成本效益分析** | 项目 | EGM-2 MV | ECGM + 补充剂 | |----------------|-----------------|-------------------| | 单升成本 | ~$300 | ~$180 + $50补充剂 | | 细胞传代间隔 | 3-4天 | 可能延长至5-6天 | | 实验一致性 | 高(标准化) | 需严格质控 | > **注**:若长期使用,ECGM方案可节省约30%成本,但需增加15%质量控制工作量 --- #### **五、替代方案推荐** 1. **混合培养基**: $$ \text{ECGM}:\text{EGM-2 MV}=1:1 \quad (\text{兼顾成本与特性}) $$ 2. **定制培养基**: 在ECGM基础上添加: - 0.5mM 丁酰环腺苷酸 - 10ng/mL hVEGF - 1%胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) --- #### **六、实施步骤** 1. **小试验证**:用6孔板同步培养3组(EGM-2 MV/ECGM/混合培养基) 2. **关键时间点**: - 第3代:检测增殖与分化标记 - 第5代:全基因组表达谱抽样检测 3. **功能测试**:在目标培养基中重复衰老诱导实验,对比流式细胞周期结果差异 --- **结论**:在严格质控和补充关键成分的前提下,ECGM可用于HCMEC/D3培养,但进行衰老相关研究时需注意: $$ \text{G0/G1期基线比例可能因培养基差异波动} \pm 5\% $$ 建议保留EGM-2 MV作为对照组培养基以确保实验可比性。
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