慢病毒转染全流程解析：从原理到稳定细胞株构建

在基因编辑与细胞生物学研究领域，慢病毒转染技术因其高效性和稳定性成为不可或缺的工具。本文将系统拆解慢病毒转染的核心原理、关键操作步骤及优化策略，帮助科研人员快速掌握从病毒包装到稳定细胞株筛选的全流程技术要点。

一、慢病毒转染核心原理：基因递送的分子机制

慢病毒（Lentivirus）属于逆转录病毒科，其独特的生物学特性使其在基因转导中具有显著优势：

• 跨细胞周期感染能力：可感染分裂期与非分裂期细胞（如神经元、心肌细胞）
• 基因组稳定整合：通过整合酶将外源基因永久整合至宿主染色体
• 低免疫原性：改造后的慢病毒载体免疫反应微弱，适合体内研究

病毒感染的分子路径解析：

1. 膜融合阶段
   病毒包膜蛋白 VSV-G 与宿主细胞表面 LDLR 受体结合，触发包膜与细胞膜融合，释放病毒核心颗粒。

2. 逆转录过程
   病毒 RNA 在逆转录酶作用下生成双链 cDNA（前病毒 DNA），这一过程可被逆转录酶抑制剂（如 AZT）阻断。

3. 基因组整合
   整合酶催化前病毒 DNA 与宿主染色体 DNA 发生位点特异性重组，整合位点多位于活跃转录区域。

4. 基因表达
   整合的外源基因借助宿主转录系统持续表达，报告基因（如 GFP）或筛选标记（如 PuroR）可用于后续鉴定。

二、慢病毒包装体系构建：质粒配比与转染优化

（一）三质粒系统组成与功能

质粒类型	代表质粒	功能描述
转移质粒