4、人鼠脊髓单细胞核制备全流程指南

人鼠脊髓单细胞核制备全流程指南

在生物学研究中，对脊髓细胞核的研究有着重要意义。以下将详细介绍人鼠脊髓单细胞核的制备方法，包括试剂准备、组织处理、细胞核分离以及后续的荧光激活核分选等步骤。

1. 试剂准备

• HB 溶液添加 ：使用合适大小的试管添加上述成分，全程保持在冰上操作。小规模实验每个样本需 2 mL 总 HB 溶液，大规模实验则需 4 mL 总 HB 溶液。
• DEPC 处理水 ：
  1. 将 1000 mL Milli - Q 水转移至干净干燥的 1 L 玻璃瓶（如 Nalgene）中，加入 1 mL DEPC，使最终浓度为 0.1% DEPC，然后盖上瓶盖。
  2. 剧烈摇晃瓶子，室温放置过夜（8 - 12 小时）。
  3. 在 15 psi 下高压灭菌 15 - 45 分钟以降解 DEPC。
  4. 让溶液在室温下冷却。
  5. DEPC 处理水可在室温下储存备用。
• DAPI 溶液 ：
  • 储备液 ：
    1. 将 10 mg DAPI（原装小瓶）溶解在 2 mL 超纯水中，最终浓度为 5 mg/mL（14.3 mM），涡旋混匀。
    2. 将溶液分装成 25 μL 体积于 1.5 mL 试管中。
    3. 储存于 - 20°C 直至使用。