5、人类和啮齿动物脊髓核制备及相关检测技术指南

人类和啮齿动物脊髓核制备及相关检测技术指南

在生物学研究中，对于脊髓核的研究有着重要的意义，涉及到基因表达、细胞类型鉴定等多个方面。本文将为大家详细介绍从脊髓核收集管的制备，到后续的RNA测序等一系列操作流程和注意事项。

1. 10x Chromium 3’ RNA - Seq v3收集管的制备

在进行10x Chromium 3’ RNA - Seq v3实验时，收集管的正确制备是关键的第一步。以下是具体的操作步骤：
1. 使用干净的剪刀或刀片，在铰链处剪掉管帽。保留管帽，并保持其清洁，直到使用。
2. 向管中加入NRB或RT缓冲液混合物（如前文所述）。
3. 盖上管帽并进行标记。
4. 短暂离心，使液体沉到管底。
5. 小心地从离心机中取出管子，确保不扰动管底的缓冲液。
6. 将管子放在冰上，直到使用。

2. FANS仪器设置

对于流式细胞术辅助的核分选（FANS），有两种选择：可以使用由核心设施雇佣的经过培训的操作员的服务，也可以独立操作分选仪器。我们建议与所在机构的核心设施合作，让经过培训的操作员进行分选，因为这种选择有几个优点：
- 在您完成上述步骤时，操作员会提前为您的运行准备好仪器。
- 操作分选仪器在技术上具有挑战性，通常需要长时间的培训。对于大多数实验室来说，让操作员进行分选是最有效和直接的选择。

然而，如果您经过培训能够操作FACS仪器，并且可以使用仪器，独立分选也是一个选择。其主要好处是能够随时进行实验，不受日程安排的限制。实际上，日程安排可能是使用此协议的实验室最具挑战性的步骤之一，试图协调两个核心设施可能尤其具有挑战性。如果您选择自