【评测】蛋白质转染诱导ips细胞

最新推荐文章于 2021-08-11 13:18:59 发布

原创最新推荐文章于 2021-08-11 13:18:59 发布 · 428 阅读

0 ·

CC 4.0 BY-SA版权

文章标签：

#细胞实验 #蛋白质 #人iPS细胞

细胞转染专栏收录该内容

10 篇文章

订阅专栏

本文详细介绍了使用核转染技术将重组的Oct4, Sox2, Klf4和c-Myc蛋白质转导入鼠成纤维细胞，以生成诱导多能干细胞(iPSCs)的实验步骤。在含有丙戊酸和HDAC抑制剂的培养基中，细胞经过多次转导后，能够形成稳定的人iPS细胞系，表达多能性标志物。该方法提高了重编程效率，为iPSCs在医学研究和临床应用中的潜力提供了新的途径。

实验方法原理	1. 研究表明，各种蛋白质都可以通过短肽结合的方式进入细胞，这种短肽可以介导蛋白质的转导。 2. 各种亲溶剂化和再折叠技术处理包涵体蛋白表达在大肠杆菌中有生物活性蛋白发展到允许容易和大规模化生产治疗性蛋白。
实验材料	鼠成纤维细胞
试剂、试剂盒	丙戊酸培养液
仪器、耗材	培养皿移液枪枪头枪头盒冰箱
实验步骤	1. 每个周期的成纤维细胞（最初细胞密度为5×104个细胞/孔，第一次治疗是在夜间进行的用重组重新编程蛋白质（即 Oct4-11R, Sox2-11R, Klf4-（11R，和c-Myc-11R），在8mg/ml的补充或补充mESC生长培养基中供给 1mm丙戊酸（VPA）的蛋白质，和可以显著提高编程效率的HDAC抑制剂。另一培养基没有VPA和抑制剂，两个培养基在下一个循环前培养36h。 2. 在完成四个重复的蛋白转导后，撞击蛋白质后处理过的细胞转移到辐照的mef饲料细胞并简单保存在mESC生长培养基中，直到克隆到30-35天。 3. 所形成的的小鼠成纤维细胞呈稳定的均匀的扩张，超过30代后，形成了圆形的紧凑的菌落。他们通过免疫化学细胞和染色表达了多能标记。
注意事项	所需的蛋白质和细胞都需要低温保存，以防止失活。
其他	1. iPSCs（特别是针对病人的）与ESCs类似，但相比之下更容易创建，在这种情况下是人类细胞，而且争议较少，存在生物医学的前所未有的机会医学研究和临床应用。实现了iPSCs需要改进的指导方法分化产生均匀性谱系特异性细胞类型的群体。 2.利用细胞内源性基因表达策略也可以更容易的重新编程所需的外生基因。