原代成骨细胞培养方法

成骨细胞的分离培养及传代：

将SD 乳鼠置入75 %酒精中浸泡5min。

于超净 台上取顶骨,

放入PBS 皿中,刮除附着组织,待骨质发 白、透亮,再放入PBS

小瓶反复冲洗,换液3 次,以0.1 %Ⅰ型胶原酶消化30min 后吸弃酶液,再以PBS 冲洗3 次 ，

加入0. 1 % Ⅰ型胶原酶,将骨剪成1mm2 大小,放置15min

后加入与酶液等量的含15 %小牛血清的DMEM 培养基,吸取上清液,以1 000r/ min 离心10min ,

将下层液接种于50ml 培养瓶,离心液去上清后接种于25ml 培养瓶,

分别加入上述培养基,置入37 ℃、5 %CO2 、饱和湿度培养箱内。

每2 日换液1 次,待细胞长满后,用0. 25 %胰蛋白酶消化,按1∶2 比例传代。

 

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