69、细胞外环境对电穿孔效率的影响

细胞外环境对电穿孔效率的影响

1. 背景介绍

电化学疗法（ECT）是一种用于增强癌细胞对非渗透性化疗药物摄取的治疗方法。它通过局部施加一系列电压脉冲，产生能使细胞膜透化的局部电场。该疗法在欧洲已实现标准化，目前广泛应用于临床治疗多种癌症，如黑色素瘤、乳腺癌复发的浅表转移灶或其他皮肤肿瘤。

细胞膜的透化程度取决于电场强度，而电场强度又与组织特性相关。肿瘤的电学性质受组织类型（如脂肪、肌肉等）和基质的影响，基质中包含嵌入水合糖胺聚糖的复杂纤维蛋白网络。然而，传统的二维体外模型缺乏细胞外基质（ECM），无法模拟肿瘤环境的电学性质。

2. 研究目的

本研究旨在通过由培养在富含携带 IKVAV 基序的自组装肽的透明质酸（HA）水凝胶上的乳腺癌细胞组成的三维体外模型，评估细胞外环境（包括电穿孔（EP）介质和细胞外基质）对电穿孔效率的影响。同时，比较不同电穿孔介质下三维培养和二维培养的结果。

3. 材料与方法

3.1 细胞培养

• 悬浮细胞 ：将贴壁的 HCC1954 细胞分离、离心，以 1×10⁶ 个细胞/mL 的浓度重悬于新鲜培养基或电穿孔缓冲液（EPB）中，每孔接种 245 µL。
• 贴壁细胞培养 ：接种 5×10⁴ 个细胞，在电穿孔前培养 72 小时，然后将培养基替换为 245 µL 新鲜培养基或 EPB。
• 三维细胞培养 ：按照先前描述的方法制备基于 HA 的支架，接种 1.8×10⁵ 个细胞在水合支架上并培养 72 小时，仅使