Ribo-seq+多组学:解码基因表达的“隐藏维度”

“【技术应用】解密翻译过程:Ribo-seq技术的革命性发现”中小编分享了Ribo-seq技术的独特优势与核心发现,那么该技术是如何应用到基础研究中的,它又是如何巧妙地将多组学数据串联,成为解码生命奥秘的关键纽带?今天伯小医继续带大家解锁基因表达的新视角。

PART 01

Ribo-seq+转录组学

01

与mRNA-seq联用:基础搭配

转录组数据反映mRNA的丰度,而Ribo-seq数据反映翻译效率。通过比较两者,可以定量分析不同基因的翻译效率,揭示翻译水平上的基因表达调控机制。例如,某些基因的mRNA丰度较高但翻译效率较低,可能受到翻译抑制因子的调控。

研究思路

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应用案例

2025年3月4日,东京大学医学研究所Toshifumi Inada团队发表在Nature Communications(IF=14.7)上的研究利用RNA-seq和Ribo-seq等技术发现,在酵母中,Grr1在UPR(未折叠蛋白反应)过程中通过介导Ubp3的降解,维持eS7A单泛素化水平,从而促进HAC1i mRNA的翻译。此外,Grr1还独立于Ubp3和eS7A泛素化,促进HAC1u mRNA 的剪接。Grr1的F-box和LRR结构域对于其功能至关重要。全面揭示了Grr1在UPR中的关键作用,特别是在HAC1 mRNA剪接和翻译过程中的调控机制(Sato et al., 2025)。

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图1 Grr1参与高效的HAC1i

### Ribo-seq 技术介绍与生物信息学数据分析 Ribo-seq(核糖体测序)是一种革命性技术,能够以单碱基分辨率解析核糖体在mRNA上的实时活动,从而揭示翻译过程的复杂性和精密性[^3]。这项技术不仅弥补了传统转录组学研究中对翻译调控机制了解不足的缺陷,还为基因表达调控提供了全新的视角。 #### Ribo-seq 的核心原理 Ribo-seq 技术通过捕捉核糖体保护片段(Ribosome Protected Footprints, RPFs),可以高精度地检测正在翻译的mRNA序列信息。这些RPFs反映了核糖体在mRNA上的位置和翻译活性,进而帮助解析翻译调控机制[^5]。此外,Ribo-seq还能用于发现新的翻译事件,如微蛋白和非编码RNA的翻译能力[^4]。 #### 生物信息学数据分析流程 高质量的Ribo-seq数据分析依赖于严谨的质控(QC)方法。以下是常见的数据分析步骤: 1. **原始数据质控**:通过对测序数据进行质量评估和过滤,确保后续分析的可靠性[^2]。 2. **比对与处理**:将过滤后的读段比对到参考基因组,并去除可能的污染或异常信号。 3. **翻译活性计算**:基于RPFs分布,计算每个mRNA的翻译效率和翻译起始位点。 4. **功能注释与可视化**:结合转录组学数据(如RNA-seq),对翻译调控模式进行功能注释和可视化展示。 以下是一个简单的Snakemake自动化流程示例,用于标准化Ribo-seq数据分析: ```python rule fastqc: input: "data/{sample}.fastq" output: "results/fastqc/{sample}_fastqc.html" shell: "fastqc {input} -o results/fastqc" rule star_align: input: "data/{sample}.fastq" output: "results/align/{sample}.bam" shell: "STAR --runThreadN 8 --genomeDir /path/to/genome --readFilesIn {input} --outFileNamePrefix results/align/{wildcards.sample}." rule featureCounts: input: "results/align/{sample}.bam" output: "results/counts/{sample}.txt" shell: "featureCounts -a /path/to/gtf -o {output} {input}" ``` #### 应用领域 Ribo-seq技术已被广泛应用于多个生物学领域,包括但不限于: - **人类大脑发育研究**:通过整合Ribo-seq和RNA-seq技术,系统解析了人类大脑发育过程中RNA翻译的动态调控机制,揭示了数千个新翻译事件[^4]。 - **疾病机制探索**:Ribo-seq可用于研究疾病发生过程中的翻译调控异常,例如癌症、神经退行性疾病等。 - **植物与微生物研究**:Ribo-seq帮助揭示植物和微生物在逆境胁迫下的翻译调控机制,为农业和环境科学提供重要线索[^5]。 ### 数据分析挑战与解决方案 尽管Ribo-seq技术具有强大功能,但其数据分析也面临诸多挑战,例如背景噪声过滤、短读段比对准确性等。为此,研究人员开发了多种工具和算法来优化数据分析流程,例如使用Snakemake实现自动化质控和分析[^2]。
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