【实验技术笔记】融合基因 + 长片段基因 + 突变基因 表达载体构建

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• 参考：
  【实验技术笔记】利用重组载体做基因过表达（pCDH 载体）
  载体构建实例解析——构建 SETD3-pEGFP-N1（Snapgene 设计引物）

1、构建融合基因表达载体

1.1 pCDH 和 pEGFP-C1、 pEGFP-N1 载体对比

• pCDH 载体：根据载体图谱可知，CMV 启动子后接多克隆位点 MCS，带 GFP 荧光蛋白，但 GFP 不是由 CMV 启动子启动的，而是由 EF1 启动子启动的，因此，插入片段与 GFP 是分开的，分别由两个不同的启动子启动。

• pEGFP-C1 载体：CMV 启动子后接 EGFP，再接多克隆位点 MCS，两者之间没有终止密码，MCS 最后有终止密码子，因此，插入片段与 GFP 是都是由 CMV 启动子启动的，EGFP 与插入片段是融合到一起的。CMV 启动子启动 EGFP - 目的基因表达
  

• pEGFP-N1 载体：CMV 启动子后接 MCS ，再接 EGFP，两者之间没有终止密码，EGFP 最后有终止密码子，插入片段与 EGFP 融合在一起。CMV 启动子启动目的基因 - EGFP 表达
  

1.2 构建融合基因表达载体

● 关键点：根据载体特点设计克隆引物

● 注意点：

• 是否需要 Kozak 序列？