在最初的基因表达,我们通常做RT-PCR,半定量RT-PCR,northern bloting等等,后来我们又通过microarray来考察基因表达水平。随着测序技术的飞速发展,RNA-seq在现在的我们实验设计中,为了验证基因表达水平,以及关联基因的表达变化,越来越成为一个重要的part。
通常来讲,RNA-seq的差异基因表达分析按照前面已经写过的流程进行。RNA-seq数据分析-reads mapping,RNA-seq数据分析-edgeR。但是,我们往往把RNA-seq的数据分析仅停留在差异表达基因的鉴定,然后再做GO分析和KEGG pathway的分析,而事实上,更为重要的是进行深度的挖掘分析。这里,我们可以看一个例子:
组蛋白的翻译后修饰可调节影响多种生物学功能的基因表达。拟南芥组蛋白甲基转移酶SET DOMAIN GROUP 8和25(SDG8,SDG25)调节pep1和flg22触发的免疫和系统获得性抗性。SDG8和SDG25通过调控基因表达调控后续生物学功能。通过生物学试验已经证明SDG8和SDG25的功能。
为了进一步验证基因表达水平,我们试验样品进行了RNA-seq分析,通过基因表达差异分析,我们鉴定了在突变体sdg8和sdg25中的上调和下调的差异基因。
进一通过GO term分析ÿ