NSUN6 抑制巨噬细胞 ferroptosis 和 M1 极化减轻脂肪组织氧化应激和炎症反应

慢性间歇性缺氧（CIH）作为 OSA 的标志性病理过程，已被证实可触发脂肪组织的氧化应激与炎症反应，而后者正是 MetS 发生发展的关键驱动因素。过往研究揭示，巨噬细胞向促炎 M1 表型的极化在脂肪组织炎症中扮演核心角色，而新型铁依赖性脂质过氧化介导的细胞死亡方式 —— 铁死亡，近期被发现可能参与这一调控过程。RNA 表观修饰作为基因表达调控的关键层，其在 CIH 诱导的脂肪组织炎症中的作用尚未被充分探索，这为本研究提供了重要的科学切入点。

本研究通过整合生物信息学分析、动物模型与细胞实验，系统探究了 RNA 甲基转移酶 NSUN6 在 CIH 诱导的脂肪组织炎症中的作用及机制。研究首先从 GEO 数据库获取 OSA 相关的两个数据集（GSE38792 与 GSE135917），前者包含 10 例 OSA 患者与 8 例对照的内脏脂肪样本，后者涵盖 58 例 OSA 患者与 8 例对照的皮下脂肪样本及 24 例 CPAP 治疗前后的配对样本。

通过 “limma” R 包进行标准化与差异基因分析，筛选出 15 个差异表达的 RNA 修饰调控因子，其中 NSUN6 在 OSA 样本中呈现显著上调。进一步通过单变量 logistic 回归与 LASSO 回归构建风险模型，发现 NSUN6 与其他 6 个调控因子（IGF2BP3、ELAVL1、TRMT61A、TRMT61B、CPSF3、CSTF3）共同构成诊断模型，其中 NSUN6 的 ROC 曲线下面积（AUC）达 0.824，提示其潜在的诊断价值。

动物实验采用 6-7 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠，随机分为 4 组（n=6）：正常空气组（NA）、4 周 CIH 处理组（CIH）、CIH+Erastin 组及 CIH+Fer-1 组。CIH 模型通过定制舱室实现，每日 8 小时（8:00-16:00）将氧气浓度在 21% 与 5% 间循环切换（周期 60 秒），持续 4 周。干预试剂中，Erastin（购自 AbMole，货号 M2679）与 Fer-1（购自 AbMole，货号 M2698）均以 DMSO 溶解，再用 PBS 稀释至工作浓度（Erastin 1mg/ml，Fer-1 0.2mg/ml），分别按 5mg/kg（每 2 天一次）与 1mg/kg（每日一次）腹腔注射，对照组给予含 2% DMSO 的 PBS。实验终点处，通过过量麻醉处死小鼠，收集附睾白色脂肪组织（eWAT）与皮下白色脂肪组织（scWAT），用于后续检测。

细胞实验采用 RAW 264.7 巨噬细胞系，在含 10% 胎牛血清的高糖 DMEM 培养基中培养。IH 模型通过三气培养箱实现，氧气浓度每 30 分钟在 5% 与 21% 间切换，持续 24 小时。NSUN6 敲低通过 siRNA 转染实现，转染 6 小时后换液，继续培养 24 小时后进行 IH 处理。铁死亡相关干预中，Erastin（10μM）与 Fer-1（2μM）在 IH 处理开始时加入培养基，对照组加入等量 DMSO。

组织学分析显示，CIH 组小鼠 eWAT 与 scWAT 的脂肪细胞直径显著增大，而 Fer-1 干预可逆转这一变化，提示铁死亡可能参与脂肪细胞肥大过程。免疫荧光染色发现，CIH 组脂肪组织中 F4/80 + 巨噬细胞浸润显著增加，且 NSUN6 在巨噬细胞中的表达水平同步升高，两者的共定位系数较 NA 组提高 2.3 倍；Western blot 结果进一步证实，CIH 组 scWAT 中 NSUN6 蛋白水平上调 1.8 倍，而 Fer-1 处理可使这一指标降低 40%。炎症因子检测显示，CIH 组 eWAT 与 scWAT 中 CCL2 与 IL-6 的蛋白水平分别升高 2.1 倍与 1.7 倍，Erastin 处理可加剧这一趋势，而 Fer-1 则显著抑制炎症因子的释放，提示铁死亡可能是 NSUN6 介导炎症反应的下游事件。

体外实验中，IH 处理可时间依赖性上调 RAW 264.7 细胞中 NSUN6 的 mRNA 表达，24 小时时达峰值（3.2 倍）。NSUN6 敲低后，IH 诱导的铁死亡标志物变化被显著逆转：GPX4 mRNA 水平回升 60%，ACSL4 mRNA 水平下降 45%，线粒体 ROS 生成减少 52%，脂质过氧化水平降低 48%。透射电镜观察显示，IH 处理导致巨噬细胞线粒体肿胀、嵴断裂及空泡化，而 NSUN6 敲低可显著改善线粒体形态。

表型分析发现，IH 组 iNOS+（M1 标志物）细胞比例增加 2.4 倍，CD163+（M2 标志物）细胞比例减少 58%，而 NSUN6 敲低或 Fer-1 处理可使 M1/M2 比例恢复至接近正常水平。炎症因子检测证实，NSUN6 敲低可使 IH 诱导的 CCL2 与 IL-6 分泌分别减少 42% 与 38%，同时伴随 MDA 水平下降 40%，SOD 与 GSH-PX 活性分别升高 35% 与 45%，提示其可减轻氧化应激与炎症反应。值得注意的是，在 NSUN6 敲低的基础上加入 Erastin，可部分逆转上述保护效应，进一步验证了铁死亡在 NSUN6 下游的调控地位。

综合来看，本研究首次揭示 NSUN6 通过促进巨噬细胞铁死亡与 M1 极化，参与 CIH 诱导的脂肪组织炎症过程。生物信息学分析确立了 NSUN6 作为 OSA 潜在生物标志物的价值，动物与细胞实验证实抑制 NSUN6 可通过抑制铁死亡通路，减轻氧化应激与炎症反应。这些发现不仅为理解 OSA 与 MetS 的关联提供了新视角，更为开发靶向 NSUN6 的干预策略奠定了实验基础。

在实验体系中，AbMole 提供的 Erastin 与 Fer-1 作为铁死亡的工具试剂，其稳定的化学特性与明确的作用靶点为机制验证提供了可靠支持，确保了实验结果的可重复性与准确性。后续研究可进一步探索 NSUN6 介导的 RNA 甲基化修饰对铁死亡相关基因的调控细节，以及在其他 OSA 相关靶器官中的作用，从而完善这一调控网络的生物学图景。