AbMole科研快报 - 哥廷根小型猪反义寡核苷酸（ASOs）活化血小板的研究

反义寡核苷酸（ASO）是一种创新的研究领域，可以选择性地调节不可成药的蛋白靶点。成年哥廷根小型猪是公认的ASO安全性测试的非临床模型，而幼年哥廷根小型猪最近已被提议用于儿科药物的安全性测试。

AbMole（https://www.abmole.cn/）精研抑制剂十年，最新的科研动态不断与您分享。本期与您分享的是：哥廷根小型猪反义寡核苷酸（ASOs）活化血小板的研究，包括糖蛋白VI（GPVI）和血小板因子4（PF4）个体发生的评估。

本研究通过体外血小板活化和聚集试验评估了各种ASO序列和修饰对哥廷根小型猪血小板的影响。我们进一步研究了潜在的机制，以表征ASO安全性试验的动物模型。还研究了成年猪和幼年猪体内糖蛋白VI（GPVI）和血小板因子4（PF4）的蛋白丰度。我们关于ASOs在成年迷你猪中直接激活和聚集血小板的数据与人类数据非常相似。PS ASOs与血小板胶原受体GPVI结合，在体外直接激活迷你猪血小板，这与在人血液样本中的发现相一致。

这进一步证实了哥廷根小型猪在ASO安全性测试中的应用。此外，GPVI和PF4在小型猪体内的丰度差异，为儿科患者ASO诱导的血小板减少症的个体发生影响提供了见解。

PRT-060318（Abmole，M5252，纯度>99%）是一种选择性的酪氨酸激酶（Syk）抑制剂，IC50值为4 nM。（https://www.abmole.cn/products/prt-060318.html）

使用包裹ASOs的链亲和素珠进行的拉下实验证实GPVI是三种ASOs （ODN2395、ISIS104838和ISIS104838-PS）的结合伙伴，这些ASOs在小型猪血小板中引起活化和聚集（图3A）。

因此，这三个含有PS -骨干修饰的ASOs通过Western blot成功地拉低了一个约75 KDa的GPVI蛋白。尽管如此，使用Ponceau染色也监测到其他非特异性蛋白。相反，即使洗脱液体积增加两倍，也未观察到与主链缺乏PS修饰的ODN2395-PO结合。

随后，为了进一步确定GPVI作为通过PS修饰的ASOs介导血小板活化的受体的作用，我们研究了SYK在GPVI下游信号传导中的作用。在ODN2395-和ISIS104838处理的样品中，SYK抑制剂预处理消除了血小板活化标志物TSP-1的增加（图3B）。

鸣谢：Allan Valenzuela, et al. Pharmaceutics. 2023 Mar 31;15, 1112.