51、用于冷冻保存的细胞接种静电纺丝纤维垫的电穿孔

用于冷冻保存的细胞接种静电纺丝纤维垫的电穿孔

1. 引言

长期储存方法的发展，若能降低冷冻保护剂的毒性风险，将使组织工程构建物（TECs）的储存和商业化成为可能，以用于下游治疗应用。二甲基亚砜（DMSO）是缓慢冷冻和玻璃化多种细胞类型、天然和工程组织中最常用和研究最多的冷冻保护剂（CPA）之一。然而，对于接受冻融细胞悬液治疗的患者，DMSO 的疗效与毒性存在争议，它还可能影响干细胞的表观遗传和遗传特征。

为了克服这些限制，可采用降低 DMSO 浓度或与其他 CPA 结合使用的方法。开发替代的、最好是天然来源的 CPA，以完全替代 DMSO，是未来的发展方向。在这种情况下，将糖类（如海藻糖和蔗糖）递送至细胞内，用于无 DMSO 的细胞冷冻保存，变得越来越有吸引力。

目前，已经提出了一些策略来克服哺乳动物细胞膜对某些不可渗透 CPA 的屏障，包括使用基因工程孔形成蛋白、热致脂质相变、内吞或纳米颗粒介导的摄取等。可逆电穿孔作为另一种递送策略，在生物医学实践中已经有了广泛的应用，如药物递送、非热组织消融、DNA 疫苗接种和电化学疗法等。此前的研究表明，可逆电穿孔特别适合将糖类递送至分离的细胞用于冷冻保存。对于某些应用，开发在标准多孔板中直接对贴壁细胞进行稳健的电透化方法似乎更为实用，这对于建立高通量和一致的 TECs 冷冻保存方法，促进其集中制造以用于常规实验室和临床应用具有重要意义。虽然最近已经出现了一些将 TECs 作为电穿孔体外模型的例子，但目前尚未有关于对细胞接种的 TECs 进行电穿孔以用于后续冷冻保存的报道。

2. 材料和方法

• 纤维垫的制备
  • 使用聚己