作图cck8_师姐请指教||第十七期 CCK8实验测定细胞增殖

最新推荐文章于 2022-10-31 14:39:27 发布

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本文介绍了CCK8实验测定细胞增殖的原理和简单步骤，包括细胞接种、CCK-8溶液添加、孵育及吸光度测定，强调其便捷性和适用于大批量样品检测的特点。

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师姐请指教||第17期

实验内容：CCK8实验测定细胞增殖

实验时间：11月1号

实验地点：4B405

预约名额：1名

高阳：15258030201/660201

实验检测原理：

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。检测非常便捷。试剂盒是已经配制好的含有WST-8的增强型CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，可以用于大批量样品的检测。

简单实验步骤：

1. 通常细胞增殖实验96孔板中每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞，按照实验需要。按照每孔100微升培养液接种到96孔板中，培养至细胞贴壁充分后。
2. 每孔加入10微升增强型CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200微升，需加入20微升增强型CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和增强型CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
5.测定数据作图分析。

end

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