核酸提取仪组成、原理及实验步骤

核酸提取仪是一种自动化设备，用于从生物样本中提取DNA或RNA。以下是其组成部分、工作原理及详细实验步骤：

组成部分

样本处理模块

功能：接收和预处理样本，如离心、混合等。

试剂分配系统

功能：精确分配裂解液、洗涤液、洗脱液等试剂。

磁珠或柱式分离模块

功能：通过磁珠或硅胶膜吸附核酸，分离杂质。

温控系统

功能：控制反应温度，确保最佳提取条件。

液体处理系统

功能：移液、混合、转移液体。

控制系统

功能：控制整个提取过程，通常配有触摸屏或计算机接口。

输出模块

功能：收集和储存提取的核酸。

工作原理

样本裂解

原理：使用裂解液破坏细胞膜，释放核酸。

核酸吸附

磁珠法：磁珠表面包被核酸吸附材料，通过磁场分离。

柱式法：核酸吸附在硅胶膜上，杂质被洗去。

洗涤

原理：使用洗涤液去除蛋白质、盐等杂质。

洗脱

原理：使用洗脱液将核酸从磁珠或硅胶膜上洗脱下来。

详细实验步骤

1. 样本准备

样本类型：血液、组织、细胞、细菌、病毒等。

预处理：如血液需离心分离血浆或血清，组织需匀浆处理。

2. 样本裂解

步骤：

将样本加入裂解液中。

混匀，确保细胞充分裂解。

温育一段时间，通常为10-30分钟。

3. 核酸吸附

磁珠法：

加入磁珠悬浮液，混匀。

温育一段时间，使核酸吸附在磁珠上。

使用磁场分离磁珠，弃去上清。

柱式法：

将裂解液加入离心柱中。

离心，使核酸吸附在硅胶膜上，弃去滤液。

4. 洗涤

步骤：

加入洗涤液，混匀。

磁珠法：使用磁场分离磁珠，弃去上清。

柱式法：离心，弃去滤液。

重复洗涤步骤2-3次。

5. 洗脱

步骤：

加入洗脱液，混匀。

磁珠法：温育一段时间，使用磁场分离磁珠，收集上清（含核酸）。

柱式法：离心，收集滤液（含核酸）。

6. 浓度与纯度检测

步骤：

使用紫外分光光度计测量A260/A280比值，评估纯度。

使用荧光定量仪（如Qubit）测定核酸浓度。

7. 储存

短期：4°C保存。

长期：-20°C或-80°C保存。

注意事项

防止降解：操作时避免核酸酶污染，保持低温。

避免污染：确保实验器具和环境无菌。

试剂质量：使用高质量的试剂，确保提取效率。

通过以上步骤，核酸提取仪可以高效、自动化地完成核酸提取过程，适用于各种分子生物学实验和临床诊断。