微生物药敏检测-E-test（扩散梯度法）

E-test（又叫Etest，即“抗生素梯度扩散试验”）是一种用于确定细菌对抗生素敏感性的常用方法，通过测试抗生素浓度的梯度来评估最低抑菌浓度（MIC）。E-test是一种结合了纸片扩散法和稀释法的技术，广泛用于临床微生物学和实验室的药敏测试。

E-test的详细步骤

1. 准备材料

   - E-test试剂条：E-test试剂条上已预制不同抗生素浓度的梯度。常见的品牌有bioMérieux的E-test。

   - 培养基：通常使用Mueller-Hinton琼脂培养基（用于大多数细菌）或其他根据细菌类型选择的培养基。

   - 待测试的细菌：纯培养的待测试细菌株。

   - 灭菌接种环：用于接种细菌。

   - 无菌生理盐水：用于悬浮细菌。

   - 培养箱：通常在37°C条件下培养。

   - 光学密度仪（可选）：用于测量细菌悬液的浓度。

2. 培养基准备

   - 配制并灭菌培养基（例如Mueller-Hinton琼脂）。

   - 将培养基倒入培养皿中，确保其表面平整。

   - 将培养基冷却至室温，待使用。

3. 细菌接种

   - 从纯培养的细菌中挑取少量，使用无菌生理盐水（或适合的缓冲液）将其稀释至适当的浓度（通常为1 × 10^6 CFU/mL，参考McFarland标准）。

   - 使用灭菌接种环或棉签将细菌悬液均匀涂布在培养基表面，确保细菌生长均匀。

4. E-test试剂条放置

   - 将E-test试剂条（已经涂布了抗生素浓度梯度）轻轻放置在细菌接种的培养基表面。

   - 确保试剂条与培养基表面接触良好，不要摇动或移动试剂条，避免造成实验误差。

   - E-test试剂条可以用于单一抗生素的测试，也可以同时测试多种抗生素。

5. 培养

   - 将接种好的培养皿放入培养箱中，通常在37°C培养18-24小时，但具体时间可能根据细菌种类和生长情况略有不同。

   - 观察细菌的生长情况，并检查E-test试剂条上抗生素梯度的抑菌效果。

6. 结果判断

   - 培养结束后，观察试剂条两侧形成的抑菌带（无菌区）。抗生素梯度的最低点，即抑菌带与试剂条相接触的区域，对应的抗生素浓度即为最低抑菌浓度（MIC）。

   - 根据MIC值来评估细菌对抗生素的敏感性。常见的解释：

     敏感：MIC低于或等于临床治疗浓度。

     耐药：MIC高于临床治疗浓度。

7. 记录与报告

   - 将MIC值记录在报告中，作为药敏测试结果的依据。

   - 通过分析结果来指导临床抗生素的选择。

E-test的优点

简便易操作：相比传统的稀释法，E-test操作简单，且不需要精确的液体稀释操作。

高准确性：能够提供精准的MIC值，适用于各种细菌和抗生素的检测。

快速：E-test通常比管内稀释法等方法节省时间，适合临床快速检测。

灵活性：可以测试多种抗生素，且适用范围广泛（包括耐药菌的测试）。

常见产品推荐

1. E-test试剂条

   bioMérieux E-test：这是最常用的E-test试剂条，覆盖广泛的抗生素和抗真菌药物，可以用于多种细菌和真菌的MIC测定。试剂条已预装不同抗生素浓度的梯度，准确度高。

   Liofilchem E-test：也是一种高质量的E-test产品，适用于细菌和真菌的药敏测试，广泛应用于临床和研究实验室。

2. 培养基

   Oxoid Mueller-Hinton Agar：这是E-test常用的培养基，适用于多种细菌的生长。

   Thermo Fisher Mueller-Hinton Agar：也是常用的培养基，适合E-test的药敏检测。

3. 细菌接种工具

   Thermo Fisher Sterile Inoculation Loops：无菌接种环，用于从细菌培养物中获取样本并涂布于培养基上。

   Oxoid Sterile Swabs：无菌棉签，用于接种细菌。

4. 培养箱

   Thermo Fisher Heraeus™ BB 15 Incubator：适用于细菌培养，确保温度恒定，适合E-test实验。

   New Brunswick Scientific：提供高精度温控的培养箱，适用于细菌的生长和E-test实验。

5. McFarland标准

   Thermo Fisher McFarland Turbidity Standards：用于准备细菌悬液，确保接种浓度的准确性。

注意事项

细菌浓度：确保细菌悬液的浓度符合标准（1 × 10^6 CFU/mL），过高或过低都会影响结果的准确性。

操作规范：E-test试剂条放置时要避免污染，且确保条带不接触培养皿的边缘，以避免误差。

抗生素选择：E-test适用于多种抗生素的检测，确保选择合适的抗生素进行测试。

观察时间：培养时间要保证充分，通常需要18-24小时，细菌的生长情况直接影响MIC值的判断。

E-test是一种快速、简便且准确的药敏测试方法，特别适用于临床微生物实验室，可以有效指导抗生素的使用和耐药性监测。