微生物药敏检测-纸片扩散法

纸片扩散法（也称琼脂扩散法）是微生物药敏检测中常用的一种方法，适用于检测细菌对不同抗生素的敏感性。以下是纸片扩散法的详细步骤以及常见的相关产品推荐。

纸片扩散法步骤

1. 准备培养基

（1）选择适合目标微生物生长的培养基，通常使用营养琼脂或Mueller-Hinton琼脂。培养基应在室温下平整，避免气泡。

（2）将培养基在适宜温度下进行灭菌处理（如121°C，15分钟），然后倒入培养皿中，冷却至凝固。

2. 接种微生物

（1）用灭菌的接种环从培养的细菌培养液中取少量菌液，均匀地涂布在培养基表面，形成一层薄而均匀的菌膜。

（2）接种时确保操作环境无菌，避免交叉污染。

3. 药物纸片准备

（1）使用药物纸片（抗生素纸片），这些纸片上已涂布有标准化浓度的抗生素。

（2）常用的抗生素纸片包括青霉素、环丙沙星、红霉素等，市面上有各种标准化浓度可供选择。

4. 放置纸片

（1）用灭菌的镊子将药物纸片放置在接种的培养基表面，确保每片纸片之间有足够的间隔，避免相互影响。

（2）轻轻按压纸片，使其与培养基表面充分接触。

5. 培养

（1）将含有药物纸片的培养皿放入37°C的培养箱中，进行常规培养（通常24小时）。

（2）在这个过程中，抗生素通过扩散作用抑制细菌生长，形成抑菌圈。

6. 观察和记录结果

（1）培养结束后，观察培养基上药物纸片周围的抑菌圈。

（2）测量抑菌圈的直径，比较与标准值，判断细菌对该抗生素的敏感性。

敏感（S）：抑菌圈较大，说明细菌对抗生素敏感。

中介（I）：抑菌圈较小，说明细菌对抗生素中等敏感。

耐药（R）：抑菌圈无明显变化或很小，说明细菌对抗生素耐药。

常见产品推荐

（1）抗生素纸片

Oxoid：该品牌提供各种抗生素纸片，如青霉素、环丙沙星、氨苄西林等，适用于多种微生物药敏检测。

Thermo Scientific：提供高质量的抗生素纸片，能够确保检测结果的准确性，种类丰富，适用于多种细菌的敏感性测试。

Becton Dickinson (BD)：该品牌提供广泛的抗生素纸片，适用于临床微生物学实验室。

（2）培养基

Oxoid Mueller-Hinton Agar：标准化的琼脂培养基，广泛应用于抗生素敏感性测试。

Thermo Fisher Scientific Mueller-Hinton Agar：另一款标准化培养基，适用于纸片扩散法。

Bio-Rad：提供高质量的培养基，符合药敏测试的要求。

（3）接种工具

接种环：确保无菌操作，常用的品牌如BD和Oxoid。

灭菌镊子：用于放置药物纸片，选择合适长度和材质的镊子，如Thermo Scientific的灭菌镊子。

注意事项

药敏测试的标准化：使用标准化的抗生素纸片和培养基，确保测试结果的一致性和准确性。

培养条件：培养温度、湿度等因素会影响测试结果，最好在37°C的恒温箱中进行。

菌种选择：确保所用菌株为纯培养，避免污染影响药敏测试结果。

抑菌圈测量：使用卡尺或量角器准确测量抑菌圈的直径，避免人为误差。

纸片扩散法是一种简便且有效的药敏测试方法，但仍需在严格的实验操作下进行，以确保结果的可靠性。