叶酸药物靶向偶联物的表征

具有靶向性及免疫原性相互制约，所以高效、安全、靶向的基因载体成为关键问题。采用如脂质体、壳聚糖、聚乙烯亚胺（PEI)、多聚赖氨酸（PLL)及PAMAM-D等，其中PAMAM-D作为一种人工合成的新型纳米高分子聚合物，是最具应用前景的基因载体之一。

PAMAM-D的主要优点有：无免疫原性；保护目的基因不受组织细胞中各种补体及酶的破坏，可由循环系统给药；易与特异性靶向分子偶联；与常用的其它非病毒载体如PEI及PLL等相比，分子大小易控制的优势。

对于叶酸修饰的PAMAM-D（folate-PAMAM-D)靶向性不多，用叶酸修饰G5-PAMAM-D（G5-PAMAM-D-fol)作为基因载体在体外将pcDNA3-tk基因质粒导入PC-3和LNCaP中，再给予前体药物GCV。

RT-PCR检测HSV-TK基因在12孔培养板上设实验组、阳性对照组及阴性对照组。以PC-3、LNCaP融合，移去培养基，用温热的PBS溶液洗涤后，用无血清培养基以G5-PAMAM-D-fol:peDNA3-tk质量比为3:1和G5-PAMAM-D:pcDNA3-tk质量比为3:1及pcDNA3-tk 1μg分别转染。4~6h后换成有血清培养基继续培养。转染24h后提取RNA。

结论：叶酸修饰的G5-PAMAM-D能够在体外将重组质粒转入并表达HSV-TK基因，其作为基因载体靶向性强，为将其应用于体内实验研究奠定了良好的基础。在正常环境下，PAMAM-D因氨基端质子化而带上正电荷，从而可以与带负电的DNA相结合，形成纳米尺寸的聚电解质复合物，该复合物具有很高的稳定性和溶解性。

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