THC通过非经典通路抑制纤维化

AG AA abstracts

单独使用THC治疗对P‐SMAD2/3与总SMAD2/3的比值影响不显著（0.8±0.02‐倍）。为了探讨第二条通路，TGF刺激增加了磷酸化RAC‐α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKT）蛋白水平。磷酸化AKT（P‐AKT）与总AKT蛋白的比值增加了2.01±0.45‐倍（图2B；p=0.15），然而在用1μM THC 预处理24小时后，P‐AKT/AKT水平降低了0.78‐±0.31‐倍（p=0.15）。单独使用THC也使P‐AKT/AKT降低至0.87±0.27‐倍。结论 THC并未改变SMAD7 mRNA或P‐SMAD2/3蛋白水平，表明其抗纤维化作用并非通过经典通路介导。THC可能通过非SMAD依赖性AKT通路发挥该作用（图 2B）。在克罗恩病中一种重要的细胞类型——人肠肌成纤维细胞（hIMF）中，THC对纤维化具有潜在有益作用。但需要注意的是，异常AKT信号传导是多种疾病（如癌症、糖尿病、心血管疾病）中发现的基础缺陷，且AKT可磷酸化超过100种不同底物，因此THC在患者中的潜在影响可能十分广泛且不会立即显现。尽管如此，仍需要进一步研究，而目前THC作为美国药品执法局一类管制物质的身份限制了相关研究的开展。

图1 转化生长因子显著增加了SMAD7 mRNA的基因表达。四氢大麻酚未改变 SMAD7 mRNA水平，表明四氢大麻酚并非通过经典的SMAD2/3途径发挥作用。

图2. A：TGF刺激显著增加了磷酸化SMAD2/3蛋白（P‐SMAD2/3）与总SMAD2/3蛋白的比值。预先使用1μM THC处理未能阻止P‐SMAD2/3水平的升高。B：TGF刺激使磷酸化AKT （P‐AKT）与总AKT蛋白的比值较溶剂对照组升高了2.01倍（±0.45；p=0.15），然而，经 1μM THC预处理24小时后，P‐AKT/AKT水平较溶剂对照组降低了0.78倍（±0.31；p=0.15）。单独使用THC也使P‐AKT/AKT比值降至溶剂对照组的0.87倍（±0.27；p=0.15）。

Sa1137 血小板反应蛋白4在小鼠术后腹腔粘连形成中的致粘连作用

魏来, Ha Seeun, 布莱恩·约尔根森, Paul J. ParkRajan Singh，汉娜h佐格，Sandra Poudrier，李敏英，卢承日

背景： 腹腔粘连，即连接两个身体表面的纤维组织，在腹部外科手术后常见。术后腹腔粘连导致大多数肠梗阻和腹痛，常需多次住院治疗和/或接受粘连松解术。尽管近年来在外科材料和技术方面取得了进展，目前仍无有效治疗腹腔粘连的方法。同时，腹腔粘连的细胞组成和病理生理学尚不明确。血小板反应蛋白4（THBS4）是一种黏附性糖蛋白，可调节伤口愈合和组织重塑。伤口愈合过程中的腹膜组织再生与腹腔粘连的发病机制非常相似。

方法： 为研究腹腔粘连的病理发展过程，我们在C57BL/6J小鼠（n=40）中建立并实施了四种致粘连手术（切口、切除、刺激和擦伤）。我们使用THBS4抗体及多种与粘连相关的特异性细胞标志物，通过免疫组化检测粘连组织。为了研究THBS4在调控粘连形成中的功能获得和功能丧失作用，我们在健康小鼠中使用腺相关病毒（AAV）介导的Thbs4过表达系统，并在诱导粘连手术后的小鼠中使用THBS4中和抗体。我们评估了THBS4的过表达和阻断对粘连形成的影响。

结果： 切口、切除、刺激和擦伤在全部40只小鼠中均诱导了腹腔粘连。然而，每种手术导致了不同形态类型的粘连形成：薄膜样（赛璐珞样）膜、厚而致密的纤维带以及内脏粘连（固定）。在粘连组织中，我们鉴定出多种混合细胞群，包括间皮细胞、肌成纤维细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、间充质干细胞、神经元细胞和巨噬细胞。与对照组织相比，粘连组织中THBS4的表达显著升高。在小鼠中通过AAV介导的Thbs4过表达可诱导回肠和结肠之间粘连的形成。相反，腹腔注射THBS4
中和抗体可防止腹腔粘连的形成。

结论：我们的数据表明，升高的血小板反应蛋白4在术后腹腔粘连的发展中起着关键作用。抑制血小板反应蛋白4可能提供治疗益处，从而预防腹腔粘连的形成。

Sa1138 纯化重组 C.DIFFICILE毒素的小鼠直肠内灌注可实现结构/功能关系的机制研究

Nicholas O. Markham, Sarah C. Bloch, John A. Shupe, 凯·华盛顿, Robert J. Coffey, 博登·莱西

艰难梭菌 每年在美国导致近50万例抗生素相关性腹泻感染和近3万例死亡。艰难梭菌的流行株产生毒素A（TcdA）和/或B（TcdB），可直接杀死细胞并在结肠黏膜中引发炎症反应。Hirota，等 首次介绍了使用来自VPI和630 艰难梭菌 菌株的纯化 TcdA/TcdB建立的小鼠直肠内灌注感染模型。我们提供了新数据，通过在巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium中产生的纯化重组TcdA和TcdB扩展了该技术，从而能够研究特定突变毒素对结肠的影响。灌注后，小鼠结肠组织经处理并用苏木精‐伊红染色，由一位经委员会认证的胃肠病理学家进行盲法评估和评分。结果显示，引起结肠损伤所需的TcdA或TcdB剂量低于先前报道的水平。此外，一个无法形成细胞内早期内体孔的TcdB突变体（1106K）未表现出结肠病理变化。目前正在开展实验，测试其他TcdB功能和结构突变体的影响。我们将TcdA和TcdB以不同比例组合，证明即使少量TcdA也具有显著的损伤作用。组织切片还使用抗Ly6G、MPO或F4/80抗体进行了免疫染色。通过半自动化图像分析对急性炎症反应进行定量，以消除传统组织病理学评分中固有的观察者偏倚和分类变量。这些染色模式还与经艰难梭菌C. difficile孢子灌胃后的小鼠结肠组织以及克罗恩病C.difficile感染患者的结肠组织进行了比较。总之，我们改进了直肠内灌注模型，表明纯化的重组TcdA和TcdB是强有力的试剂，具有更高的灵活性，有助于更好地理解发病机制中的结构/功能关系。此外，我们应用了额外的图像分析方法，以改善对艰难梭菌C. difficile毒素引起的急性炎症反应的解释和比较。

Sa1139 氨基酸的新治疗策略：谷氨酸单钠对胃肠道炎症的预防和治疗作用

天ヶ瀬菊子, 纳赫拉·哈穆达, 增田悠也, 加藤大辅, 松本健次郎, 加藤真一

背景与目的: 尽管谷氨酸在营养学上并非必需氨基酸，但它可在体内合成，并参与多种生理功能的调节，因此被认为是一种生理上的“必需”氨基酸。在我们之前的研究中，谷氨酸可抑制非甾体抗炎药引起的大鼠小肠损伤以及 Helicobacterpylori(H.pylori)诱导的蒙古沙鼠胃炎。已有报道称聚谷氨酸可改善胃部菌群失调，且谷氨酸代谢有助于免疫系统细胞的功能。本研究旨在通过多种胃肠道损伤模型阐明难治性胃肠道疾病的治疗策略。

方法: 雄性C57BL/6小鼠经口服接种H. pylori TN2GF4，2周后处死。分别给予含1%和5%谷氨酸单钠的饮食（MSG），从接种H. pylori前1周开始持续喂养3周。5‐氟尿嘧啶（5‐FU）是一种广泛用于癌症化疗的药物，通过连续6天重复给药在雄性C57BL/6小鼠中诱导肠黏膜炎。在5‐FU治疗开始后第6天组织学评估肠黏膜炎情况。谷氨酸（500 mg/kg和1000 mg/kg）于每天两次口服给药，分别在5‐FU治疗前30分钟和治疗后8小时进行。

结果与讨论: 接种H.pylori两周后引发胃炎，表现为水肿/充血并伴有白色粘稠物质，同时髓过氧化物酶活性升高。喂食1%和5% MSG可显著预防H. pylori诱导的胃炎及MPO活性的升高。与标准饮食（STD）喂养的小鼠相比，5%谷氨酸饮食小鼠胃内可存活的H. pylori数量显著减少。然而，在体外实验中，MSG喂养1周对H.pylori在琼脂平板上的生长无任何影响。与STD喂养小鼠相比，MSG喂养小鼠的PAS阳性黏液层厚度显著增加。此外，MSG喂养显著增强了胃黏膜中三叶因子（TFF）‐1的表达。连续6天给予5‐FU诱发严重的肠黏膜炎，组织学上表现为绒毛缩短和隐窝破坏，并伴有体重减轻和腹泻。5‐FU治疗在第6天显著增加了MPO活性，但谷氨酸治疗显著减弱了这一反应。每日给予谷氨酸对体重减轻和腹泻无明显影响。谷氨酸给药显著抑制了5‐FU引起的隐窝破坏，这可能与凋亡的抑制有关。

结论: 这些发现表明，谷氨酸可能对预防和治疗H.pylori引起的胃损伤以及癌症化疗期间的肠黏膜炎具有应用价值。