38、微生物培养、多糖提取及抗菌性能研究

微生物培养、多糖提取及抗菌性能研究

一、A.brunnescens胞外多糖生产研究

1.1 接种物制备与摇瓶培养

• 种子培养 ：将5块约0.5 cm²的斜面培养物转移至装有100 mL种子培养基的250 mL锥形瓶中，在25 °C、150 rpm的旋转摇床上培养3天。
• 摇瓶培养实验 ：在装有100 mL发酵培养基的250 mL锥形瓶中，接入10 % (v/v)的接种物，在25 °C、150 rpm的旋转摇床培养箱中培养7天。

1.2 分析方法 - 胞外多糖浓度测定

1. 将100 ml发酵液在8,000 rpm下离心10分钟，取上清液用于检测胞外多糖浓度。
2. 在上清液中加入两倍体积的无水乙醇，剧烈搅拌，室温放置过夜，使粗胞外多糖沉淀。
3. 将沉淀的多糖在8,000 rpm下离心10分钟收集，然后在60 °C下干燥以去除残留的乙醇。

1.3 正交矩阵法优化EPS生产

1.3.1 实验因素与水平选择

为了研究因素之间的关系并优化胞外多糖（EPS）生产的浓度，采用正交矩阵L9(4⁵)方法。根据初步实验，选择并改变了四个因素的四个水平，具体如下表所示：
| 实验编号 | 葡萄糖 (g/L) (A) | YE (g/L) (B) | KH₂PO₄ (g/L) (C) | MgSO₄·7H₂O (g/L) (D) | 空白 (E) |
| ---- | ---- | ---- | ----