人白细胞介素2（IL-2） ELISA

简介

白细胞介素2（IL-2）是一个细胞因子家族的成员，其每个成员都有一个四条α螺旋束；该家族还包括IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21。IL-2通过IL-2 受体发出信号，这是一个由三条链组成的复合物，被称为α、β和γ。伽马链是所有家族成员共有的。IL-2受体（IL-2R）α亚基与IL-2结合的亲和力低（Kd~ 10-8 M）。由于IL-2的细胞内链较短，IL-2和CD25单独相互作用不会导致信号转导，但有能力（当与β和γ亚单位结合时）将IL-2R的亲和力提高100倍。IL-2R的β和γ亚单位的异源二聚化对T细胞的信号传导至关重要。

本试剂盒人IL-2免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的人IL-2。试剂盒包含大肠杆菌表达重组人IL-2和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然人IL-2获得的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然人IL-2的相对质量值。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物IL-2，清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色后，若样本中有待测物则显蓝色，加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中IL-2的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(pg/mL)	1000	500	250	125	62.5	31.25	15.63	0
OD值	2.579	1.442	0.823	0.524	0.331	0.246	0.165	0.087
校正OD值	2.429	1.355	0.736	0.437	0.244	0.159	0.078	0

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

精密度

操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。

操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。

	操作内精密度	操作间精密度
样本	1	2	1	2
测定次数（n）	20	20	10	10
平均值M（pg/mL）	565.25	86.16	570.57	91.73
标准差SD	40.7	3.88	46.21	5.69
变异系数CV（%）	7.2%	4.5%	8.1%	6.2%

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

样本类型	范围（%）	平均回收率（%）
血清(n=8)	86-102	94
血浆(n=8)	90-106	98
细胞培养上清(n=8)	94-110	102

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为7.81 pg/mL。

线性关系

分别在选取的4份健康人血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度IL-2，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

稀释比例	回收率（%）	血清	血浆	细胞培养上清
1:2	范围（%）	82-96	90-98	92-112
1:4	范围（%）	88-104	89-107	104-116
1:8	范围（%）	85-102	92-101	99-115

特异性

该试剂盒测定可识别重组人IL-2。

其他相关因子在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。