大鼠Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)ELISA

简介

Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTXⅠ)，也被称为C端端肽，是纤维状胶原的C端端肽，如I型和II型胶原。CTX为细胞外基质中成熟的胶原纤维降解产物。它有多种形式，其中常用的 β-CTX 进入血液后不被降解，由肾脏直接排出，也被用作血清中的生物标志物，以测量骨的周转率。

本试剂盒大鼠CTXⅠ免疫测定是一种三步法固相夹心ELISA，用于测量细胞培养上清液、血清和血浆中的大鼠CTXⅠ。试剂盒包含大肠杆菌表达重组大鼠CTXⅠ和针对重组蛋白产生的抗体。使用天然大鼠获得CTXⅠ的结果显示出与使用重组标准品获得的标准曲线平行的线性曲线。这些结果表明，该试剂盒可用于测定天然大鼠CTXⅠ的相对质量值。

检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法ELISA技术：将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的待测物CTXⅠ，孵育清洗后，再加入生物素标记的检测抗体进行孵育后清洗，形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”免疫复合物，随后加入链霉亲和素偶联的辣根过氧化物酶进行孵育，待孵育结束后清洗，接着加入TMB显色液后，若样本中有待测物则显蓝色，则加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物的含量呈正比，通过绘制标准曲线计算出样本中CTXⅠ的浓度。

示例数据

以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。

标准品浓度(ng/mL)	10	5	2.5	1.25	0.625	0.313	0.156	0
OD值	2.512	1.753	1.022	0.611	0.505	0.273	0.175	0.057
校正OD值	2.455	1.696	0.965	0.554	0.448	0.216	0.118	0

本图所示标准曲线仅供示例，结果计算应以同次试验标准品所绘标准曲线为准计算样本结果。

精密度

操作内精密度（测定中的精密度）在一块平板上对两个已知浓度的样品进行20次测试，以评估测定内精密性。

操作间精度（测定间精度）在10个单独的测定中测试两个已知浓度的样品，以评估测定间精度。至少有三名技术人员进行了实验。

	操作内精密度	操作间精密度
样本	1	2	1	2
测定次数（n）	20	20	10	10
平均值M（ng/mL）	7.20	1.70	7.31	1.65
标准差SD	0.35	0.06	0.51	0.09
变异系数CV（%）	4.8%	3.6%	7.0%	5.3%

回收率

回收率在不同基质的整个测定范围内选取在健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入3个不同浓度水平计算回收率。

样本类型	范围（%）	平均回收率（%）
血清(n=8)	86-102	94
血浆(n=8)	90-106	98
细胞培养上清(n=8)	94-110	102

灵敏度

经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为0.08ng/mL。

线性关系

分别在选取的4份健康大鼠血清、血浆和细胞培养上清中加入高浓度CTXⅠ，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。

稀释比例	回收率（%）	血清	血浆	细胞培养上清
1:2	范围（%）	82-96	90-98	92-112
1:4	范围（%）	88-104	89-107	104-116
1:8	范围（%）	85-102	92-101	99-115

特异性

该试剂盒测定可识别天然和重组大鼠CTXⅠ。

其他相关蛋白在稀释缓冲液中制备为50ng/mL，并测定交叉反应性。没有观察到明显的交叉反应。