Mirus TransIT-X2® 在RNAi干扰实验中性能数据展示

不同RNAi干扰途径示意图

基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用，化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。常见参与RNAi干扰途径的天然RNA分子包括：

★.小干扰 RNA (Small interfering RNAs, siRNA) ：由双链 RNA(dsRNA)断裂所产生的短双链 RNA(20-25bp)；

★.微小 RNA(MicroRNAs, miRNAs) ：非编码 RNA 处理后所产生的一类短的、单链 RNA(20-22nt)。

利用 RNAi 抑制基因表达的另一种方法为短发夹 RNA(short hairpin RNA , shRNA)，这些短 RNA 序列可通过病毒或非病毒载体方式进行表达，更多详细信息可查阅Mirus Applications | RNAi Gene Silencing。

请见访问链接：Applications | RNAi Gene Silencing – Mirus Bio ；更多Mirus产品或技术资料问题，请联系Mirus授权代理商欣博盛生物。

基于siRNA核酸递转类型的基因沉默研究，相比Lipofectamine® 2000，TransIT-X2®有着更高的基因沉默效率

TransIT-X2®Dynamic Delivery System和Lipofectamine®2000转染试剂用于转染siRNA(靶点为内源性蛋白质- GAPDH和AHA1)，对照使用正常人类真皮成纤维细胞(NHDF)递转非靶向siRNA。Trans IT-X2®加入量为4µl， Lipofectamine®2000加入量为6µl，siRNA加入量都为25 nM。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平测量GAPDH或AHA1 mRNA进行检测，转染后48小时均一化至非靶向对照组的mRNA水平，误差则为三次复孔实验的标准差。

基于miRNA (miRNA Precursor及miRNA mimic)基因沉默研究，相比Lipofectamine® 2000，TransIT-X2®有着更高的基因沉默效率

TransIT-X2®Dynamic Delivery System和Lipofectamine®2000转染试剂用于转染Pre-miR™ hsa-miR-1 miRNA Precursor 或者mirVana™ miRNA mimic, miR-1 (两者都已验证，可降低PTK9 mRNA表达水平)。Pre-miR™阴性质控用于评估mRNA表达水平基线值。Trans IT-X2®及Lipofectamine®2000试剂加入量都为3µl， 加入50 nM miRNA。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平，经过阴性质控的均一化，得到PTK9 mRNA表达水平值。

  Mirus TransIT-X2® 在CRISPR基因编辑实验中性能数据展示  

经过改造及优化的细菌 CRISPR/Cas9 系统，已被广泛应用到哺乳细胞的基因编辑中。基于CRISPR基因编辑实验常见两组分：Cas9蛋白及引导RNA(gRNA)。当Cas9蛋白切割了靶向基因组DNA，会触发两种内源性修复机制，即非同源末端连接(NHEJ)和同源定向修复(HDR)，以应对细胞中产生的DNA断裂。基于NHEJ细胞修复通路，为非精准、且容易出错细胞修复通路，可引入导致基因功能缺失的Indel。基于HDR的细胞修复通路，则需要额外的同源 DNA 作为修复模板，从而实现“精准”修复，在目的基因插入特定的基因或长片段序列。