单细胞RNA测序（scRNA-seq）细胞分离与扩增

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单细胞RNA测序（scRNA-seq）工作流程入门

1. 单细胞的分离

如何获得单细胞，从而进行下一步的测序过程？具体有以下几种方法：

一、流式细胞仪(FACS)方法

常用的方法之一是使用流式细胞仪(FACS)方法进行分离。但是 FACS 也有缺点，首先需要较大的起始细胞量，同时可能导致有些孔中有两个，有些孔中没有细胞。

二、显微操作分离

显微操作提供了获得少量细胞的替代方法，我们可以通过直接特定位置摘取单个细胞进行测序，但是这种方法依赖于人工操作，无法实现高通量进行。

三、微流控技术

近些年微流控技术在单细胞分选上展现良好的应用，微流控技术可以对整个过程进行监控和处理，其缺点主要在于固定的微流控芯片等。通过多通道微流控自动处理技术进行处理，可以允许自动分离和处理细胞，同时控制细胞的数量和实验的误差。

2. 全基因组扩增

对于一个细胞（哺乳动物细胞）而言，通常细胞DNA不到10pg，需要先对全基因组进行扩增才能开展后续的实验。全基因组扩增技术(WGA)主要是通过 PCR、多重替换扩增技术(MDA)或两者的组合来实现。