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RSS订阅原创 兔单B细胞单抗制备服务
基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备，利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从兔子的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群。兔单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。
2025-04-08 16:41:45
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原创 牛单B细胞单抗制备服务
单B细胞技术能够根据B细胞的特性快速制备单克隆抗体，直接获取完整的单一来源抗体，该方法不限种属、效率高、特异性高、抗体亲和力高、可成药性高、基因多样性好且具有全天然源性，并且能够直接获得抗体基因序列。的技术，基于流式细胞分选技术进行单B细胞单抗制备，利用每个B细胞只含有一个功能性重链可变区DNA序列和一个轻链可变区DNA序列且只产生一种特异性抗体的特性，从。的淋巴组织中收集B细胞，通过单克隆化技术从单个抗体分泌B细胞中扩增重链和轻链可变区基因，从而将收集到的B细胞扩增成单一来源的克隆群。
2025-04-08 16:38:44
558
原创 驼单B细胞单抗制备服务
卡梅德生物利用此技术，从羊驼外周血或免疫器官中提取淋巴细胞，通过分选技术鉴定和分离出特定的B细胞后将其进行单细胞培养，使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和抗体特异性引物鉴定单B细胞分泌抗体的特异性，通过PCR技术扩增出特异性抗体基因，将其克隆到表达载体中，并在指定的系统中进行表达，纯化好的抗体通过ELISA等方法进行表达验证。产生两种类型的抗体：(i) 由重链和轻链二聚体组成的常规抗体，以及 (ii) 一类只具有重链不含轻链，被称为重链抗体（heavy Chain Antibody，hcAb）。
2025-04-08 16:36:00
539
原创 核酸适配体筛选
4) 洗脱结合的适体；6）重复步骤(2)-(5)，获得与目标配体具有高亲和力和高特异性的适配体。卡梅德生物提供的适体体外筛选技术，在对蛋白质（细胞，小分子多肽）的适体筛选的实验中，能快速筛选出候选靶分子。利用SELEX法，卡梅德生物的科学家为客户提供适体体外筛选服务，如：蛋白质的适体筛选（细胞的适体筛选等），客户只需提供靶标蛋白或相关序列或序列号，卡梅德生物将对靶标蛋白进行SDS-PAGE检测，之后进行蛋白文库的制作与靶蛋白筛选，然后解离筛选的适配体，重复洗脱筛选，经PCR，NGS测序，最后合成适配体。
2025-04-08 16:34:02
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原创 纳米抗体文库构建概述
酵母是另一个普遍使用的微生物表达宿主，其结合了原核表达系统的优势（周期短、成本低、操作简单）和真核表达系统的优势（正确的折叠、修饰和分泌），使得它成为最受欢迎的可表达全长IgG或者其他抗体形式的宿主。CDR3凸环中的一个半胱氨酸还可以与CDR1 或FR2 的45位点的半胱氨酸形成二硫键，可使纳米抗体的生物结构相对稳定，大大降低纳米抗体与抗原结合所需能量，使得高亲和力的纳米抗体的获得较容易。抗体设计的最优功能表达和纯化是决定它们实现应用命运的关键因素，因此选择合适的表达体系是获得最大收益的重要环节。
2025-03-06 15:09:40
605
原创 噬菌体展示技术的两大核心：建库和筛选
噬菌体库的分类包括：（1）随机肽库：将化学合成的随机寡核苷酸序列与噬菌体的表面蛋白基因融合，在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的随机序列短肽。骨髓内和骨髓外所有抗体基因都包含在内，所构建的抗体库适用于所有抗原所对应的抗体的选择，库容量要求较高，最小需要达到109，因为目前估算的自然界的抗原种类在这个数量级上。主要有三种类型： scFv库（由VH和VL组成，并由一个小肽（Gly4Ser）3连接成一个单链多肽）、Fab库（含有VH-CH，VL-CL，并由二硫键连接在一起）和VHH库（只有重链可变区）。
2025-03-06 15:06:08
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原创 噬菌体展示肽库筛选服务原理和流程
第三步是通过重复洗涤“去除未结合和非特异性的噬菌体”去除任何未结合且非靶标特异性的噬菌体。噬菌体展示技术是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过3-5轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。
2025-03-06 15:00:35
412
原创 噬菌体展示肽库筛选研究背景
（4）随机肽库：随机肽库被设计为序列优化不可或缺的工具，选定的位置同时被所有20种天然氨基酸取代，可以增加肽活性。噬菌体展示将大量多肽或蛋白制成肽（蛋白）库，然后与噬菌体外壳蛋白融合表达，多肽（蛋白）展示在病毒颗粒表面，而编码该多肽（蛋白）的DNA则位于病毒颗粒内部。利用展示肽（蛋白）与其编码DNA之间的这种联系，通过多轮亲和淘选，快速筛选到所需的特异性多肽/蛋白，然后将噬菌体扩增后，直接进行测序，找出与特异性结合多肽/蛋白相对应的DNA序列。（4）序列分析：分析与靶标结合的噬菌体所携带的肽序列。
2025-03-03 11:00:53
532
原创 噬菌体展示技术：单克隆抗体的革命
利用该技术，研究人员可以通过特定的淘洗策略，去除与靶分子非特异性结合的噬菌体，并通过酸碱处理或竞争性分子的方法，有效地洗脱那些特异性结合的噬菌体。相较于天然库，免疫库能够筛选出具有更高亲和力和特异性的抗体，因为其中的特异性抗体丰度由于免疫选择压力而显著增加，部分还经历了免疫系统的亲和力成熟过程，这使得即便是较小的库容量也能筛选到有效的功能性抗体及其基因。偏性肽库和突变肽库等。噬菌体建库涉及从B淋巴细胞中扩增抗体的H链和L链基因，并将抗体片段与噬菌体衣壳蛋白融合表达于噬菌体表面，形成噬菌体展示抗体库。
2025-01-22 09:15:52
546
原创 揭秘纳米抗体：羊驼的免疫奇迹
得益于其紧凑的结构、强大的抗原识别能力和成熟的噬菌体筛选技术，纳米抗体可以高效地进行体外重组表达并大规模生产，有效克服了传统抗体生产过程中常见的批次间差异问题，为生物医学研究和治疗提供了一种强有力的工具。（5）DNA免疫原：通过合成目标蛋白的编码DNA序列来制备，DNA免疫原的优势在于可以精确控制蛋白的编码序列，从而实现对特定抗体产生的调控。：这类免疫原通常由完整的蛋白质或重组蛋白片段构成，能够有效模拟天然条件下的抗原表位，激发强烈的免疫反应，从而诱导产生具有高亲和力和特异性的纳米抗体。
2025-01-22 09:04:37
991
原创 哺乳动物细胞转染实验
瞬时转染基因表达维持的时间较短，所以通常在24~96h内收获细胞，然而，导入的遗传物质的高拷贝数导致其在细胞内的蛋白质表达水平较高，因此，瞬时转染一般用于研究基因或基因产物的短期表达，基因敲除或RNA介导的基因沉默，以及进行蛋白质小规模合成。关于基因片段转移的方法有转化、转导、感染、转染等，其中，细胞转染是指将外源遗传物质例如DNA、RNA、质粒等在一定条件下导入真核细胞的一种实验技术，是用于研究基因表达对细胞生理水平的影响以及获得重组蛋白的重要手段。图1：稳定转染和瞬时转染示意图[2]
2024-12-29 21:06:22
913
原创 重组蛋白表达的几种形式
同时，酵母细胞也可以进行大规模培养和高表达，适用于一些复杂蛋白的表达，不会产生毒素，安全可靠。获取重组蛋白的基本步骤包括：目标基因的扩增、插入克隆载体、亚克隆到表达载体中、转化到蛋白表达宿主中(大肠杆菌、酵母细胞、哺乳动物细胞或杆状病毒-昆虫细胞)、重组蛋白鉴定试验(SDS-PAGE、Western blot)、蛋白放大和纯化[3]。通过将外源基因导入宿主细胞，并使其表达特定蛋白，能够获取大量高纯度的重组蛋白[2]，为疾病治疗、药物研发和生物工程等领域提供了强有力的支持，产生了巨大的经济价值与社会效益。
2024-12-29 21:01:21
851
原创 蛋白质免疫印迹（Western Blot）常见问题及解决方案
抗体不能识别目标蛋白，检查抗体信息，抗体选择是否正确，能否用于WB验证。可能是表达的蛋白样本具有多种修饰形式，如乙酰化、磷酸化、甲基化、烷基化、糖基化等，可以使用去修饰的试剂使蛋白恢复其正常的大小。（2）原因：一抗不识别检测物种的蛋白。解决方法：检查一抗和二抗的种属，二抗需和一抗宿主的物种相同。（1）抗体的原因：检查一抗种属是否正确，二抗是否匹配一抗，抗体孵育时间和用量是否合适；（3）转膜的原因：转膜不能过度，蛋白分子量小需适当降低转膜电压或时间；（2）蛋白的原因：蛋白上样量少，需增加上样量；
2024-12-02 09:17:57
472
原创 重组蛋白昆虫表达的优势和载体选择
该系统中的病毒基因组经过改造后（称为杆状病毒穿梭载体Bacmid），能够在大肠杆菌如DH10Bac菌株中复制，通过供体质粒中目的基因的两侧锚有Tn7转座原件，借助DH10Bac菌株中helper质粒编码的转座酶活性，将目的基因转座到bacmid特定位点上，目的基因的插入会导致bacmid上的LacZ基因产生移码，进而通过蓝白斑筛选鉴定出阳性重组bacmid，提取后转染昆虫细胞。并通过同源重组等方法将外源基因插入到病毒DNA中，外源基因随着病毒DNA的复制而复制，并在细胞内表达出外源蛋白。
2024-12-02 09:00:30
694
原创 【卡梅德生物】蛋白质免疫印迹（Western Blot）实验
没有可见条带的另一个原因是抗原的浓度低或不存在，在这种情况下，可以使用来自其他来源的抗原来确认问题是否出在样品上或其他问题（例如抗体）上。最后，这个问题也可能是由二抗的聚集引起的，在这种情况下，应将二抗离心并过滤以除去聚集的二抗。异常条带可能是由于蛋白酶降解造成的，蛋白酶降解会在意想不到的位置产生条带，在这种情况下，建议使用新鲜样品或改变抗体。模糊的条带通常是由传输过程中存在的高压或气泡引起的，在这种情况下，应确保凝胶在较低的电压下运行，并且正确制备转移夹心。良好的样品制备确保目标蛋白完好的进行下游分析。
2024-11-09 12:16:56
1239
原创 [卡梅德生物]哺乳动物细胞转染常见问题及解决方案
细胞密度会影响转染效率，汇合度为50-70%时，具有优秀的转染性能，而在低于或高于该密度的情况下，都会对转染效率造成影响。脂质体毒性、转染浓度过高、转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡，这种情况下就需要适当优化转染条件，适当调整细胞传代数、细胞密度、转染浓度和转染时间等。这里需要强调的是实验对照的设定，也是一个很重要的优化实验的手段，每个实验必须有相应的对照。可能是由于转染时的融合度波动和细胞发生变化导致，不同批次的转染时最好保持所有的转染参数恒定，如融合度、传代次数和生长时间相等。
2024-11-09 12:13:01
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原创 【卡梅德生物】蛋白质N端测序实验常见问题及解决方案
对于序列未知的蛋白质，特别是经过改造后的重组蛋白质，体外合成蛋白质，以及改造的抗体，或者基因序列未被研究过的蛋白质，这类蛋白质的信息往往不包含在蛋白质数据库中。修饰封闭：N 端未被封闭；例如，Edman讲解法测序不能够解决蛋白质N端环化、封闭的测序问题，另外被修饰的蛋白质不能给出确切的信号，这些都在一定程度上限制了Edman降解法的广泛应用。对未知的蛋白质来说，如果蛋白质的N端有环化封闭现象，或者N端有未知修饰时，如何对蛋白质序列进行准确分析呢？（4）若蛋白质出现糖基化或N端被封闭，不能用此方法进行测试。
2024-11-09 12:09:00
505
原创 【卡梅德生物】蛋白质N端测序实验
Edman降解法与质谱法不同，Edman降解法属于化学方法，随之延伸出的Edman测序已成为一种成熟的蛋白质序列测定技术，其不需要借助蛋白数据库便可以直接进行序列分析。Edman测序的一个关键优势是结果直观，可以直接得到氨基酸序列，但它不能用于N-末端封闭或修饰后的氨基酸残基。因此，可将质谱法LC-MS/MS的N-端测序技术与基于Edman降解的测序技术相结合形成互补，便可准确鉴定蛋白质的N-端序列。蛋白样品一般先进行SDS-PAGE的分离，保证样品的纯度满足测序的要求；1.蛋白质N端测序实验。
2024-11-09 12:06:20
885
原创 酵母双杂交实验常见问题及解决方案
诱饵的自激活，是通过报告基因的表达来检测的。双杂报告基因包含HIS3，ADE2，MEL1，lacZ以及AbAr，理论上所有的报告基因都可以用于自激活检测。现有实验技术，AbAr和HIS3产生的自激活更容易获得相应的抑制剂。如果实验结果发现，原本已知有相互作用的蛋白质，在实验时未检测出来，那么可能是由于蛋白质折叠或局部结构不完整、表达量过低、转录激活因子缺失等因素引起的。可以选用更为严格的筛选条件抑制诱饵蛋白的自激活活性，如果效果不理想，可以删除诱饵蛋白能够引起自激活活性的结构域，再用于酵母双杂交实验。
2024-10-28 00:38:38
808
原创 酵母双杂交实验
（7）该方法测试活细胞中的蛋白质相互作用，不需要分离的蛋白质（只需要基因），并且相当容易执行。作为一种基因技术，酵母双杂交筛选提供了一种敏感且经济的方法来测试两个目标蛋白之间的直接相互作用，或使用蛋白质作为诱饵来筛选从所需的细胞类型、组织或整个生物体制备的蛋白质片段库。诱饵与猎物（即AD-Y融合蛋白）相互作用，则DNA-BD和AD也随之被牵拉靠近，从而重建一个功能性转录因子，恢复行使功能，激活报告重组体中LacZ和HIS3基因的表达。（2）将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；
2024-10-28 00:37:44
1194
原创 昆虫细胞系统表达与纯化蛋白常见问题及解决方案
昆虫细胞系统能够对表达出的蛋白进行翻译后修饰。杆状病毒昆虫细胞表达系统适用于多种类型的蛋白表达，鉴于昆虫细胞可实现高密度培养的特性以及相对原核系统较为完备的后修饰和蛋白折叠机制，杆状病毒昆虫细胞表达系统通常被较多的用于胞内定位蛋白的表达，并且其在表达一些稳定性相对较差的蛋白，比如转录因子等方面也有一定的优势。重组表达的后修饰会出现不均一的情况，但不是所有的后修饰都会对蛋白活性有影响，所以需要结合该蛋白的修饰位点在功能上的作用进行分析，不同的修饰不一定在活性上有差异。.昆虫细胞表达的蛋白具有翻译后修饰吗？
2024-10-24 17:53:08
823
原创 简述昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化
第一个永生化的昆虫细胞系是在1960年代建立的，之后陆续已经从许多不同昆虫中建立了数百种昆虫细胞系，部分细胞系用于表达重组蛋白，用于基础研究，部分昆虫细胞系现在被用于制造生物制品。昆虫细胞广泛用于重组蛋白表达，通常作为重组杆状病毒载体的宿主，也用于质粒介导的瞬时转染或稳定的基因转化，SF9和Sf21细胞是昆虫细胞表达系统的常用宿主细胞。并通过同源重组等方法将外源基因插入到病毒DNA中，外源基因随着病毒DNA的复制而复制，并在细胞内表达出外源蛋白。，转染至Sf9或Sf21昆虫细胞即可进行重组病毒的制备。
2024-10-24 17:50:51
1339
原创 昆虫系统表达-大分子蛋白/跨膜蛋白表达
对于某些容易在大肠杆菌表达系统中由于二硫键错误配对或者缺乏蛋白翻译后修饰(如磷酸化和糖基化等)而形成包涵体的蛋白，一般在昆虫表达系统中高水平表达的重组蛋白往往可溶，而且能折叠正确，并且含有对某些蛋白活力所必须的翻译后修饰(如磷酸化和糖基化等)，常用于表达跨膜蛋白。通过同源重组等方法将外源基因插入到病毒DNA中，随着病毒DNA的复制而复制，在细胞内表达出外源蛋白。（4）该系统可同时表达多种重组蛋白，所以特别适合表达多亚基的蛋白复合物以进行蛋白的结构功能研究等。（3）外源基因表达水平高，而且比较容易分离纯化；
2024-10-12 19:07:44
1121
原创 哺乳动物瞬时蛋白表达
CHO细胞表达系统简单易用，比使用大肠杆菌表达蛋白方便许多，系统的可扩展性很好，可根据需要进行放大或缩小，以实现早期发现中的高通量生产。哺乳动物细胞瞬时表达系统是指宿主细胞在导入表达载体后不选择培养，目的基因随细胞分裂逐渐丢失，蛋白表达时限短，该系统的优点是简捷，实验周期短，成本低。这是因为哺乳动物细胞系统蛋白表达是广为应用的人类复杂糖基化蛋白的表达系统。，也是活性蛋白因子及各类受体蛋白的优异表达系统，在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合，在悬浮培养基中密度高，且培养容量高。
2024-10-12 19:03:31
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