Frdbio®藻红蛋白抗体快速标记试剂盒

藻红蛋白（R-phycoerythrin ,R-PE）是从红藻中分离提纯的一种荧光蛋白，最大激发波长为565nm，最大荧光发射峰为575nm。由于其吸光度和荧光量产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高备受免疫检测标记领域青睐。R-PE蛋白的亚基组成为（αβ）6γ，每个α、β亚基分子量为20KDa，每个γ亚基分子量为30KDa,总分子量为240kDa。目前还没有办法通过重组蛋白表达量产，只能从红藻中提取，因此其生产成本制约其广泛使用。

产品介绍：

藻红蛋白（R-phycoerythrin ,R-PE）是从红藻中分离提纯的一种荧光蛋白，最大激发波长为565nm，最大荧光发射峰为575nm。由于其吸光度和荧光量产率很高，荧光强而稳定，灵敏度高备受免疫检测标记领域青睐。R-PE蛋白的亚基组成为（αβ）6γ，每个α、β亚基分子量为20KDa，每个γ亚基分子量为30KDa,总分子量为240kDa。目前还没有办法通过重组蛋白表达量产，只能从红藻中提取，因此其生产成本制约其广泛使用。

基本原理：

本试剂盒利用抗体和R-PE上游离的氨基，采用定向对接偶联技术将抗体分子与R-PE共价偶联，本试剂盒采用加长臂方案，使被标记抗体与荧光蛋白之间有一定长度柔性连接臂，避免由于位阻妨碍抗体活性或者荧光蛋白发光效率。

主要特点：

ü  试剂盒组分齐全，操作简单，只要按照操作步骤进行便可得到高品质R-PE标记抗体；

ü  本试剂盒所配置的R-PE为高纯度，高活性荧光蛋白，荧光发光效率更高；

ü  本试剂采用定向偶联技术，荧光蛋白和抗体都不会发生自连，保证偶联物的特异性和均一性；

ü  试剂盒所使用的交联剂增加了延长臂，确保不会因为蛋白质位阻而影响发光效率；

ü  鉴于R-PE的蛋白骨架特性，其抗淬灭能力更强。

                                              

试剂盒已经提供材料：

规格	0.5mg	1mg	2mg
活化R-PE蛋白	32ul	64ul	128ul
标记缓冲液	30ml	30ml*2	30ml*3
抗体修饰试剂	1支	1支	1支
30KMWCO超滤管	1支	1支	1支
DMSO溶剂	200ul*1支	200ul*1支	200ul*1支
说明书	1份	1份	1份

其他需要自备试剂材料：

²  待标记的生物分子；

²  移液器及吸头；

²  去离子水。

试剂盒储存

试剂盒中抗体修饰试剂放在-20˚C，其余组分放在2-8℃可保存6个月以上,若抗体修饰试剂溶解,则放在2-8℃可保存一周左右。

试剂盒操作流程：-

1.抗体的修饰

1）向抗体修饰试剂干粉中加入200ul DMSO,充分混匀;

2）取待标记抗体（纯度>90%），用标记缓冲液调整到 2mg/ml左右为宜，按照每mg抗体加入30μl 抗体修饰试剂溶液，轻轻混匀，在室温下避光搅拌反应 90分钟；【如果抗体量太少，抗体修饰试剂溶液加入量不少于0.5ul】

3）反应完毕后，将其转入30KMWCO超滤管，用标记缓冲液超滤5-10次（每次12000rpm 1min），每次管芯内液体体积不超过原体积1/4为宜，最后一次超滤完成，管芯内液体即为修饰的抗体。

2.活化藻红蛋白与抗体偶联

1）将修饰抗体与活化藻红蛋白溶液混合（每1mg修饰抗体对应62.5ul活化藻红蛋白溶液）,室温避光反应1小时；

2）标记好的抗体分装，加入适当保护剂，-20℃保存备用。

注意事项：

1） 本试剂盒中抗体修饰试剂为高活性试剂，-20℃保存,其余成份2-8℃保存、勿冻存。

2）试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒，会使液体或干粉试剂粘到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。

3）本试剂盒中活化藻红蛋白液体为高活性试剂，标记过程尽量保证其避光；

4）抗体修饰试剂需现用现配，干粉溶解后不能长期保存；

5）使用本试剂盒标记抗体，其抗体特异性要高，纯度不低于90%，最好使用单克隆抗体，溶液环境不含游离氨基，最好为PBS溶液；标记前抗体需去除NaN3和BSA，抗体的透析、浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失，因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适的抗体量；

6）由于抗体修饰后所带的基团容易被重新氧化，因此修饰后抗体需尽快与活化的R-PE进行偶联；

7）本试剂盒中的超滤管为特殊处理的，可有效避免荧光淬灭和蛋白吸附损失，市面超滤管可能会对标记效率造成影响。

8）本试剂盒中部分试剂为高活性试剂，对皮肤和身体有一定的危害，请全程戴手套操作；DMSO属微毒类，对人体皮肤有渗透性，对眼有刺激作用，使用时避免与皮肤、眼睛和粘膜接触。