20K人类蛋白组芯片原理是什么?

20K人类蛋白组芯片,芯片上有2万多种全长蛋白质,覆盖81%的人类基因组ORF区。重组蛋白采用酵母表达系统,逐个进行表达与纯化鉴定。在芯片上每个蛋白质均设置至少2个技术重复点,并设有多种质控点,确保实验体系稳定可靠。

其检测原理可见下图:

白色的部分是我们芯片的片基部分,上面蓝色的是纯化出来的蛋白固定在芯片上,黄色部分是小分子,绿色五角星是生物素,灰色的是链霉亲和素,红色的是CY3荧光(或CY5)。在进行芯片实验时,您的化合物(或其他物质)会和我们的芯片进行孵育,如果化合物和蛋白有结合,小分子就会结合到蛋白上。如果不进行生物素的修饰,那么我们是没有办法进行结合的监测的,虽然结合上了,但是看不到,所以我们对小分子进行生物素标记,这样链霉亲和素就可以和生物素进行结合,进而荧光就可以固定在结合的蛋白上,这样我们就可以通过检测荧光的发光情况去检测小分子与蛋白的结合。

20K原理.png

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