28、细胞DNA损伤修复与共定位研究及肌动蛋白结合蛋白调节方法

细胞DNA损伤修复与共定位研究及肌动蛋白结合蛋白调节方法

细胞DNA损伤修复与共定位研究

在细胞研究领域，测量γH2AX和53BP1的共定位对于理解DNA损伤修复机制至关重要。部分用于测量二者共定位的数据集此前已发表。通过让处于周期和非周期的人乳腺上皮细胞系MCF10A暴露于铁离子来诱导DNA损伤，对重带电粒子进行DNA修复研究，能够深入了解复杂DNA损伤的修复过程，这对于辐射风险评估和防护至关重要。

从计算角度来看，检测焦点和共定位主要存在以下问题：
1. 重叠细胞核的检测 ：为逐细胞进行定量分析提供背景信息。
2. 各通道荧光信号的异质性 ：不同通道的荧光信号可能存在差异。
3. 共定位研究方法 ：需要合适的方法来准确评估共定位情况。

材料与方法

细胞培养条件、辐射暴露、免疫染色方案和图像采集等细节此前已有详细报道。简单来说，将处于周期或静止期的人乳腺上皮细胞MCF10A暴露于1或2 Gy的968 MeV/amu铁离子（线性能量转移LET = 151 keV/µm）。在暴露后的不同时间，对细胞单层进行γH2AX和53BP1焦点形成的免疫染色。用4′,6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚（DAPI）对细胞进行复染，空气干燥后用Vectashield封片，然后进行图像采集。使用Zeiss Axiovert落射荧光显微镜，配备Zeiss平场复消色差40×干式镜头和科学级12位电荷耦合器件相机进行图像采集。同一数据集中的所有图像以相同的曝光时间捕获，确保强度在12位线性范围内，以便在不同样本之间进行比较。在11个焦平面