数字PCR简介(一）

     数字PCR即Digital PCR，它是是一种核酸分子绝对定量技术。数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。

     在定量PCR时，我们常常纠结一个问题，究竟是相对定量还是绝对定量呢？现在我们再也不需要去纠结这个问题了，因为数字PCR帮我们解决了。尽管这两种技术有些类似，都是估计起始样品中的核酸量，但它们有一个重要的区别。定量PCR是依靠标准曲线或参照基因来测定核酸量，而数字 PCR则让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。

数字PCR技术的原理

       数字PCR（也可称单分子PCR）一般包括两部分内容，即PCR扩增和荧光信号分析。在PCR扩增阶段，与传统技术不同，数字PCR一般需要将样品稀释到单分子水平，并平均分配到几十至几万个单元中进行反应。不同于qPCR对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字PCR技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。最后通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。

       图1.数字PCR技术原理：A: 数字PCR过程，第一步稀释样本分配至每个反应单元进行PCR反应，第二步荧光检测；B：分子信标

       基因突变分析原理；C：BEAMing检测原理。

 

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