KU-55933 是一种有效的 ATM 抑制剂 |MedChemExpress (MCE)

CAS：587871-26-9

品牌：MedChemExpress (MCE)

存储条件：Powder: -20°C, 3 years; 4°C, 2 years.In solvent: -80°C, 6 months; -20°C, 1 month.

生物活性：KU-55933 是一种有效的 ATM 抑制剂，具有 IC50 和 Ki分别为 12.9 和 2.2 nM，与 DNA-PK、PI3K/PI4K、ATR 和 mTOR 相比，对 ATM 具有高选择性。 IC50 和目标：IC50：12.9 nM (ATM)[1]  

体外：KU-55933 (10 μM) 阻断电离辐射诱导的 p53 丝氨酸 15 磷酸化。 KU-55933 在抑制这种 ATM 依赖性磷酸化事件方面具有剂量依赖性作用，估计 IC50 为 300 nM。 KU-55933 消除电离辐射诱导的这些 ATM 底物的磷酸化。 KU-55933 特异性抑制 ATM，但不抑制其他 DNA 损伤激活的 PIKK、ATR 和 DNA-PK[1]。 KU-55933 诱导 pATM、p53、E2F1 和 pATR，在 0.5 小时时间点显着上调 E2F1 的核部分[2]。二甲双胍增加 ATM 和 AMPK 磷酸化，以及原代肝细胞中的 SHP 蛋白水平，二甲双胍的这种刺激作用被特定的 ATM 激酶抑制剂 KU-55933[3] 抑制。

激酶试验：用于体外测定的 ATM 是通过用兔多克隆抗血清在含有 25 mM HEPES (pH 7.4)、2 mM MgCl2、250 mM KCl、500 μM EDTA、 100 μM Na3VO4、10% v/v 甘油和 0.1% v/v Igepal。通过与 Protein A-Sepharose 珠子一起孵育 1 小时，然后通过离心回收珠子，从核提取物中分离出 ATM-抗体复合物。在 96 孔板的孔中，将含有 ATM 的琼脂糖珠与 1 μg 底物谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66（p53 的 NH2 末端 66 个氨基酸与谷胱甘肽 S-转移酶融合）在 ATM 测定缓冲液中孵育 [25 mM HEPES (pH 7.4)、75 mM NaCl、3 mM MgCl2、2 mM MnCl2、50 μM Na3VO4、500 μM DTT 和 5% v/v 甘油]，37°C，存在或不存在抑制剂。轻轻摇动 10 分钟后，添加 ATP 至终浓度 50 μM，并在 37°C 下继续反应 1 小时。将板在250×g下离心10分钟（4℃）以去除含有ATM的珠子，去除上清液并转移至白色不透明96孔板中并在室温下孵育1.5小时，以使谷胱甘肽S-转移酶-p53N66 结合。然后用 PBS 清洗该板，吸干，并使用磷酸丝氨酸 15 p53 抗体通过标准 ELISA 技术进行分析。磷酸化谷胱甘肽 S-转移酶-p53N66 底物的检测是与山羊抗小鼠辣根过氧化物酶缀合的二抗结合进行的。使用增强型化学发光溶液产生信号，并通过 TopCount 读板器进行化学发光检测。

细胞试验：将 1BR 或 AT4 细胞接种在 10 厘米培养皿中并在第 2 天进行处理（80% 至 90% 汇合）。将细胞与 KU-55933 或载体对照预孵育 1 小时，然后暴露于 5 Gy 的电离辐射。进行细胞周期分布的时间进程，并且选择群体区分的最佳时间为16小时。所有后续实验均在 16 小时时间点进行。根据标准方案用碘化丙啶对细胞进行染色，并使用 FACScalibur 通过 FACS 进行分析。将 60 mm 培养皿中呈指数生长（50-70% 汇合）的 SW620 细胞暴露于 KU-55933 或 DMSO 中 1 小时，然后添加依托泊苷（终浓度为 0.1 和 1 μM）16 小时，然后收获、碘化丙啶染色和分析如上。

参考详情：www.medchemexpress.cn/KU-55933.html

参考文献：

[1]. Hickson I, et al. Identification and characterization of a novel and specific inhibitor of the ataxia-telangiectasia mutated kinase ATM. Cancer Res. 2004 Dec 15;64(24):9152-9

[2]. Khalil HS, et al. Pharmacological inhibition of ATM by KU55933 stimulates ATM transcription.Exp Biol Med (Maywood). 2012 Jun;237(6):622-34. Epub 2012 Jun 22.

[3]. Kim YD, et al. Orphan nuclear receptor SHP negatively regulates growth hormone-mediated induction of hepatic gluconeogenesis through inhibition of STAT5 transactivation.J Biol Chem. 2012 Sep 12.