干货分享 | 如何做 RNA 干扰实验？(常见问题+解决方案）

RNA 干扰技术是研究基因功能的一种强大工具，这种技术有可能直接从源头上让致病基因“沉默”。今天就让我们一起来学习如何做 RNA 干扰实验！

RNA干扰 (RNA interference, RNAi) 是指一种高度保守的细胞机制，其中Argonaute (Ago) 家族蛋白结合小 RNA，通过小 RNA 和靶 RNA 之间的序列互补性触发较长 RNA (即靶 RNA) 的降解。RNAi 机制首次由 Andrew Z. Fire、Craig C. Mello 及其同事在线虫 (Caenorhabditis elegans) 中描述，也因此获得了 2006 年诺贝尔生理学或医学奖。

图 1. 2006 年诺贝尔生理学或医学奖授予了 RNAi 机制的发现者[1]。

自发现以来，RNAi 已迅速发展成为一种强大的反向遗传学工具，用于在细胞和生物体水平上研究基因功能、调控和相互作用。在昆虫和其他动物中，已知有三类不同的小 RNA 可触发三条相应的 RNAi 途径：siRNAs、miRNAs 以及 piRNAs。
本期小 M 为大家介绍 siRNA 干扰途径！

 

siRNA 是一种小的双链 RNA (dsRNA)，约有 20-25 个核苷酸长度，可以触发 RNA 干扰机制。长双链 RNA 在被 Dcr2 与 R2D2 或 Loqs 切割成短双链 RNA。短双链 RNA 解旋后正义链被降解。

图 2. siRNA 诱导的 RNA 干扰机制[2]。

反义链与多种蛋白组分 (如 Ago2) 形成 RNA 诱导的沉默复合体 (RNA Induced Silencing Complex, RISC)。RISC 中保留的反义链与靶基因的 mRNA 特异地互补，同时 RISC 具有核酸酶活性，能将靶基因的 mRNA 切割降解，抑制靶基因的表达。
 

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设计 siRNA

如果您希望设计自己的 siRNA，可根据以下原则来设计 siRNA[3][4][5]。然后，通过化学合成、体外转录、载体或 PCR 产物表达等方式进行制备相应的 siRNA。

一些在线网站可以基于一定规则设计出 siRNA 序列。如，DSIR Home page； 
siDirect。
 

  设计规则如下