单克隆抗体常见问题

问题1.为什么免疫后没有效价或免疫后效价低？

 

答：可以从这几个方面去查找原因：

（1）免疫的抗原，分子量和抗原性是否合适；分子量最好不小于25kDa;对于小分子化合物或者多肽，需要偶联载体蛋白，比如KLH,OVA或者KLH，一般首选KLH;

 

(2)免疫的佐剂是否合适，免疫的佐剂常用的是弗氏完全佐剂与不完全佐剂，可以试试其他的佐剂，比如水溶性佐剂；

 

（3）免疫程序是否合适，不同佐剂需要设计不同的免疫程序，一般免疫三次后，效价依然没有起色的话，就需要重新考虑目前的抗原设计、抗原和免疫程序问题；

 

（4）免疫计量问题，蛋白类抗原，免疫之前，通过SDS-PAGE确定蛋白量的问题，比其他蛋白浓度测定方法更靠谱；每种蛋白浓度测定方法都有其缺陷；

 

（5）免疫方式问题，免疫的时候尽可能多点，多部位，必要的时候可以配合脾脏免疫和尾静脉免疫；

 

（6）效价测定的问题，测免疫效价，一般采用间接ELISA法，这个方法需要搭建好ELISA测定程序，比如抗原包被的最佳浓度选择，二抗使用浓度，底物灵敏度；另外，对于不同浓度的抗原，对其效价的评价需要区别对待：对于抗原性比较较弱的，1:10000以上就是非常好的选择，对于小分子效价，1:3000也算成功。

 

问题2:融合后细胞不长或者融合后克隆很少？

 最重要的制约因素：血清，融合剂PEG，SP2/0状态，小鼠种系

（1）培养基和血清问题，特别是血清，市面上的血清良莠不齐，不管是什么牌子的，需要亲自做融合测试筛选，筛选到最适合融合培养的，这个工作量有点大，很多人不愿意去做；