18、视频生物信息学方法在人类胚胎干细胞铺展量化中的应用

视频生物信息学方法在人类胚胎干细胞铺展量化中的应用

1. ROCK抑制剂和Blebbistatin对hESC铺展的影响

在细胞培养领域，2007年有研究发现ROCK抑制剂（Y27632）能提高人类胚胎干细胞（hESC）在培养中的存活效率。不过，ROCK参与众多信号通路，可能影响细胞的多种特性。ROCK抑制剂会降低非肌肉肌球蛋白II的活性，这有助于hESC的附着。但当用ROCK抑制剂处理单个hESC时，由于E - 钙黏蛋白的下调，细胞之间不会相互黏附。而且，用强效ROCK抑制剂Y27632处理的hESC，相比未处理的对照组，显得压力更大且健康状况较差。另外，在甲基汞的毒理学研究中使用ROCK抑制剂（Y27632）会降低IC50。

Blebbistatin作为ROCK下游肌球蛋白II的抑制剂，也可用于增加hESC的附着，从而提高铺板效率，还可能改变细胞形态。

为了研究不同ROCK抑制剂和Blebbistatin对hESC铺展的影响，进行了如下实验：
- 实验准备 ：将H9 hESC接种在涂有基质胶的Hi - Q4培养皿中，并设置不同的处理条件进行孵育。
- 数据采集 ：把细胞放入BioStation IM中培养4小时，在此期间，以1分钟的间隔在每个处理/对照组的三到四个不同视野拍摄图像。
- 数据处理 ：
1. 使用ImageJ的去除异常值功能，去除BioStation软件在每张图像上标记的文字数据。
2. 将专业的CL - Quant协议应用于处理后的延时视频。
3. 应用测量协议确定每个帧中被掩膜细胞的面积（