graphpad如何加标注_发文章怎样让Western blot图更好看？第三招教你用Graphpad软件进行统计分析...

原标题：发文章怎样让Western blot图更好看？第三招教你用Graphpad软件进行统计分析

大家好，前面我们介绍了 以及 的定量，那么拿到灰度定量值之后，我们怎样进行下一步的处理呢？今天继续为大家介绍运用Graphpad统计软件对蛋白WB灰度值进行统计分析。

首先介绍下Graphpad统计软件，它是一款常用的科研图表绘制软件。医学科研中，常用的科研图表绘制一般包括：散点图、线图、条图和面积图。常见统计方法的图形表达有： 成组t检验、方差分析、独立样本秩和检验、简单线性回归和线性相关、生存分析等等。而GraphPad Prism是一款集数据分析和作图于一体的数据处理软件，简单易学，功能实用，操作便捷，作图美观，可以帮助科研人员轻松制作统计图。

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在得到ImageJ灰度值保存的EXCEL之后，我们主要关注intden。在进行至少三次独立重复实验之后，首先需要对得到的灰度值进行简单预处理，分别将p-Akt intden的数值除Akt intden的数值，计算得到p-Akt/Akt的比值。

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打开Graphpad软件，点击[New]进行新建。软件提供了5款图的基本类型供选择：XY图(XY graphs)，柱状图(Column graphs)，组合群图(Grouped graphs), 列联表(Contingency tables), 和生存率图(Survival plots)。在这里我们以柱状图为例，简单介绍下统计图的制作。选择点击Column进行图表建立。

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进入主页面，我们发现软件右侧是目录树。点击Data tables中的Data1(数据集)在GroupA 与GroupB中分别输入处理因素0um与2um，然后将三次WB测定的灰度值依次输入到对应栏中。

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数据输入结束后，点击Graph中Data1(图形)，软件会弹出几种柱状图样式供选择。同时注意勾选平均值加减标准误(Mean±SEM)显示或者均值加减标准差(Mean±SD)，点击OK即可生成柱状图。

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如上图，我们发现柱状图较宽，看起来并不美观。这时选择Change中的第二个图标，可以修改柱状图的坐标轴以及X/Y轴的调整。如图点击shapes-size，选择tall，可以将柱状图形状变窄，同时，点击X axis等可以修改坐标轴量程范围，颜色，坐标轴的粗细等进行调正。

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柱状图完成后，下一步进行注释的添加，在DATA1中添加统计图名称以及坐标轴内容,比如在标题栏输入p-Akt/Akt，在纵坐标一栏输入phosphoprotein。

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柱状图做好后，如果需要进行两组之间统计学分析，点击Analyse-column analyses,选择t检验或者单因素方差分析进行统计学分析，设定显著性水平。

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计算P值之后，下一步对统计图进行标注，可以选择点击Draw,选择合适的框线。

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当然也可以直接将P value 数值添加在柱状图上方，点击工具栏中的T，插入*号即可。

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统计图做好之后，最后一步就是导出图片啦，点击工具栏中的Export,选择TIF格式图片，进行统计图的存储。

由蛋白免疫印迹实验结果照中条带的强弱转化为数值，进而求得数值的统计学差异，对蛋白条带进行量化，并以柱状图展示，使结果更为直观可信。快来动手操作起来吧。

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